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- 2026-02-21 发布于浙江
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第一部分专题八
生物技术与工程;
必备整合3;
①能在细胞中进行自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制
②有一个至多个限制酶切割位点
③具有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选;
表达载体目的基因:人们所需要的基因
终位置:目的基因的下游
学功能:终止转录
标记基因:用于目的基因的检测与筛选;
①目的基因主要是指编码蛋白质的基因,在已有mRNA前提下,可通过逆转录法获取目的基因。当基因较小且序列已知时,可采用化学合成法进行人工合成。
②目的基因应插在启动子与终止子之间。
③农杆菌细胞内含有Ti质粒,当它侵染植物细胞后,能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞,并且将其整合到该细胞的染色
体DNA上。;
3.限制酶的选择技巧
(1)根据目的基因两端的限制酶切点选择限制酶
①应选择切点位于目的基因两端的限制酶,不能选择切点位于目的基因
内部的限制酶,如图甲不能选择限制酶SmaI。
②为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲可选择PstI和EcoRI两种限制酶(但要确保质粒上也能被切出相同的黏性末端,如图乙)。;
其会破坏启动子,不宜选择其切点位于启动子、终止子之间,宜选择
其会破坏终止子,不宜选择;
T-DNAT-D
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