基因工程的基本工具和操作程序—— 高考生物一轮总复习.docxVIP

基因工程的基本工具和操作程序

重组DNA技术的基本工具

1.基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。下列关于基因工程的叙述，错误的有________。

①基因工程的原理是基因突变

②从操作层面看，基因工程是在细胞水平上进行设计和施工的

③基因工程能克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传性状

④基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的

提示①②

2.基因工程的工具

EcoRⅠ限制酶的识别序列和切割位点为5′－G↓AATTC－3′，SmaⅠ限制酶的识别序列和切割位点为5′－CCC↓GGG－3′。下列关于限制酶(限制性内切核酸酶)的叙述，正确的是________。

①限制酶只存在于原核生物中

②限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开

③EcoRⅠ限制酶切割DNA分子后形成平末端

④SmaⅠ限制酶切割DNA分子后形成黏性末端

⑤EcoRⅠ限制酶是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶

提示②⑤

1967年，世界上几个实验室几乎同时发现了一种能够将两个DNA片段连接起来的酶，称之为DNA连接酶。下列关于DNA连接酶的叙述，错误的有________。

①DNA连接酶催化磷酸二酯键的断裂

②T4DNA连接酶只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，不能连接具有平末端的DNA片段

③E.coliDNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端

④T4DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于E.coliDNA连接酶

⑤DNA连接酶与DNA聚合酶是同一种酶，作用相同

提示①②④⑤

思维升华(1)DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。

(2)DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。

基因工程中的载体，能携带外源DNA片段进入受体细胞，被称为“分子运输车”。

(1)基因工程中通常是利用________作为载体，将基因送入细胞。除此以外，常用的载体还有________________________等。

提示质粒噬菌体、动植物病毒

(2)作为基因工程的载体，应满足哪些主要条件？

提示①能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；②有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段(基因)插入其中；③有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选。

题型1基因工程的两大工具酶(科学思维)

[例1](2023·新课标卷，6)某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。

下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()

A.质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA连接酶连接

B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接

C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接

D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接

答案C

解析酶3切割后得到的是平末端，可以用E.coliDNA连接酶，但E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶，A不符合题意；质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能连接，B不符合题意；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4DNA连接酶连接，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C符合题意；若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D不符合题意。

1.根据限制酶切割位点的位置确定限制酶的种类

(1)应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。

(2)不能选择切割位点位于目的基因和标记基因内部的限制酶，如图甲、乙不能选择SmaⅠ。

(3)为避免目的基因和质粒的自身环化及随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。

2.根据质粒的特点确定限制酶的种类

3.根据Ti质粒的T－DNA片段选择限制酶

图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取，而丙Ti质粒宜选取(切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ)，分析如下：

题型2载体的作用及特点(科学思维)

[例2]