蛋白质修饰与表达调控研究.pptVIP

第三章蛋白质的修饰和表示;第一节蛋白质修饰的化学路径;影响化学修饰的主要原因有两方面：

1、蛋白质功效基的活性反应，涉及基团之间的氢键和静电作用等，基团之间的的空间阻力。

2、修饰剂的反应活性。;一、蛋白质侧链的化学修饰;;（一）巯基的化学修饰

因为巯基有很强的亲核性，巯基基团普通是蛋白质分子中最容易反应的侧链基团。

烷基化试剂是一种主要的巯基修饰试剂，尤其是碘乙酸和碘乙酰胺。氨基酸测序前，常用碘乙酸来使巯基基团羧甲基化，以预防半胱氨酸的降解。

其它某些卤代酸、卤代酰胺也能够修饰巯基。

N-乙基马来酰亚胺也是一种有效的巯基修饰试剂，该反应含有较强的专一性并伴随光吸收的变化。

;;;;;;;;;;二、蛋白质的位点专一性修饰;;;;;三、蛋白质的聚乙二醇修饰;;;四、蛋白质的化学交联和化学偶联;蛋白质分子的固定化;酶的固定化可通过吸附法、交联法、包埋法、共价结合法去实现。

1、交联法

是利用双功效或多功效试剂在酶分子间、酶分子与惰性蛋白间或酶分子与载体间进行交联反应，把酶分子彼此交叉连接起来，形成网络结构的固定化酶。

常用的交联剂是戊二醛和双重氮联苯胺-2，2-二磺酸。;;;;第二节蛋白质的分子生物学改造;一、基因突变技术;（一）定点突变

对已知基因的特定碱基进行定点变化、缺失或者插入。

含有突变率高、简单易行、重复性好的特点。

野生型的绿色荧光蛋白（wtGFP）在紫外光激