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透射电子显微镜观察细胞自噬的具体步骤及详细方法

技术简介

透射电子显微镜(TransmissionElectronMicroscope,TEM)

是使用最为广泛的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品，

同时与样本相互作用，既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大

倍数高的优点。其分辨率为0.1-0.2nm，放大倍数为几万到几十万倍。

目前透射电镜已经广泛的应用到癌症研究，病毒学研究，微生物学，

细胞学研究等生物领域。

透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备超薄切片(通常为50-100nm)。要在机体死亡后的数分钟内取材，组织块要小(1mm3以内)，常用戊二醛和俄酸双重固定，包埋介质包埋，用超薄切片机切成薄片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。

自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构，直径一般为300~900nm，平均500nm，普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法，是自噬检测的“金标准”。

二、实验流程

透射电镜生物样品制备步骤：

1.固定：用2.5%的戊二醛固定2小时。

2.俄酸固定：用2