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细胞实验指南

一、实验前准备

1.1试剂配制与储存

基础培养基配制

完全培养基根据细胞类型确定配方，贴壁细胞常用DMEM高糖培养基，悬浮细胞常用RPMI-1640培养基，配方如下：基础培养基占比89%，胎牛血清（FBS）占比10%，100U/mL青霉素-链霉素双抗溶液占比1%。配制前将基础培养基、FBS置于4℃冰箱过夜解冻，双抗从-20℃取出恢复至室温；在超净工作台内用75%酒精消毒所有试剂瓶口，无菌移液器按比例混匀试剂，0.22μm滤膜过滤除菌后分装为50mL/管，4℃避光储存，有效期为1个月，避免反复冻融。

特殊培养基需根据细胞需求添加额外成分：内皮细胞培养基需添加1%内皮细胞生长因子（ECGS）、50μg/mL肝素；干细胞培养基需添加10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20ng/mL表皮生长因子（EGF）；耐药细胞株培养基需添加对应筛选浓度的抗生素（如HepG2/ADR细胞需添加1μg/mL阿霉素）。

常用缓冲液与消化液配制

磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa?HPO?、0.24gKH?PO?，加入800mL去离子水充分溶解，用1mol/LHCl调节pH至7.2-7.4，定容至1L，121℃高压灭菌20min，室温储存，有效期6个月，使用前确认无浑浊、无微生物污染。

胰蛋白酶-EDTA消化液：0.25%胰蛋白