水稻叶绿体表达体系的建立及抗PPT叶绿体转化植株的获得.PDF

中国农业科学 2007,40(9):1849-1855 Scientia Agricultura Sinica 水稻叶绿体表达体系的建立及抗PPT叶绿体转化植株的获得 1 2 3 2 1 1 李轶女 ，孙丙耀 ，苏 宁 ，孟祥勋 ，张志芳 ，沈桂芳 1 2 3 （中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081； 苏州大学生命科学学院，苏州 215123 ； 中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081） 摘要：【目的】建立外源基因在水稻叶绿体中的表达体系。【方法】通过分析已公布的水稻叶绿体基因组全 序列及其基因分布特点，选择 ndhF 与 trnL 的基因间序列作为除草剂 PPT 抗性基因 bar 定点整合的位点。以水稻 叶绿体基因组 DNA 为模板，采用 PCR 方法克隆了两个适于水稻叶绿体基因组遗传转化的同源片段，构建了含水稻 叶绿体 16S 高效表达启动子、外源基因 bar、psbA 基因的 3′序列（终止子）以及两个同源片段的水稻叶绿体特 异表达载体pRB。【结果】采用基因枪法转化水稻品种中花10号幼穗诱导的愈伤组织，并再生植株，获得转化体 后代种子。对转化植株进行的分子检测结果表明，外源基因 bar 可能被整合到水稻叶绿体基因组中。后代种子的 遗传学分析显示，外源基因 bar 可正常表达并遗传。【结论】利用所建立的水稻叶绿体外源基因表达体系，外源 基因 bar 既可在水稻叶绿体基因组中正常表达，还可作为转化体筛选时的除草剂抗性选择标记。 关键词：水稻；同源片段；bar 基因；叶绿体转化 Establishment of a Gene Expression System in Rice Chloroplast and Obtainment of PPT-Resistant Rice Plants 1 2 1 2 1 1 LI Yi-nü , SUN Bing-yao , SU Ning , MENG Xiang-xun , ZHANG Zhi-fang , SHEN Gui-fang (1 Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 2 College of Life Sciences, Suzhou University, Suzhou 215123; 3 Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081) Abstract: 【Objective 】 The aim of this study was to establish an expression system for alien genes in rice chloroplast. 【Method 】Through analyzing the sequence of rice chloroplast genome and its gene distribution pattern, the intergenic region of ndhF and trnL was selected as target for site-specific integration of PPT-resistant bar gene. Two fragments suitable for homologous recombination were c