RRS光谱法测长春地辛 .docVIP

【标题】RRS光谱法测长春地辛 【作者】曾珍 【关键词】长春地辛，赤鲜红，共振瑞利散射 【指导老师】杨季冬 【专业】环境科学 【正文】引言长春地辛( Vindensine sulfate?,VDS)是一种双吲哚类生物碱[1]，其结构式如图1所示，吲哚(上半部分的长春质碱环)中的A环和双氢吲哚(下半部分的文多灵环)中的B环是活性较强的部位，是一种半合成的长春碱类药物，可以与细胞内的转铁蛋白形成共价键，阻止铁的运输[2]。作用机理是药物干扰细胞周期的有丝分裂阶段(M期)，从而抑制细胞的分裂和增殖。其细胞毒性是通过与微管蛋白的结合实现的，它们在微管蛋白二聚体上有共同的结合位点，可抑制微管聚合，妨碍纺锤体微管的形成，从而使分裂于中期停止，阻止癌细胞分裂增殖?[3]。临床用于非小细胞肺癌、小细胞肺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌、食管癌、及恶性黑色素廇等恶性肿瘤等有效[4]，单一用药每次3mg/m2?,7-10天一次，通常连续用药4-6次为一周期,?生理盐水溶解后缓慢静脉注射。长春地辛的副作用是最常见的为白细胞降低，对血红蛋白有影响，轻度食欲减低，恶心和呕吐,?骨髓抑制和神经毒性[5]等。目前国内外对于长春地辛的研究内容大部分是长春地辛和其他药物连用的药理学及临床的应用?[6]，而对其样品中的测定研究很少。以往罗猛用HPLC（高效液相色谱法）[7]考察了VDS（长春地辛）加热降解过程，用HPLC法考察了VDS原料的纯度检验方法[8]，文献报道还有高效毛细管电泳法[9]，但其操作需前处理，所需试剂仪器昂贵，运行时间长，因而发展一种简便、快速的方法具有一定实际意义。我们将用RRS法（共振瑞利散射，是指当瑞利散射位于或接近与分子吸收带时，电子吸收电磁波频率与散射频率相同，电子因共振而强烈吸收光的能量并产生再次散射，这种吸收-在散射的过程称为共振瑞利散射）测定长春地辛。其优点在于方法简单,便于操作,灵敏度高，药用量少等。操作方法：在荧光分光光度计上，以λex=λem对溶液进行同步扫描，可得到共振瑞利散射光谱，然后于最大共振散射峰处测定结合产物的散射强度I和试剂空白散射强度I0,△I?= I?- I0由于长春地辛具有独特的物理-化学性质，在药用领域中表现出许多显现和潜在的应用价值，引起人们的研究兴趣。肺癌，长春地辛对非小细胞肺癌效率为23%，对治疗比较困难的肺腺效率达29%，是当前比较突出的药物。与阿霉素及环磷酰胺并用，或与顺氯氨铂及环磷酰胺并用，效率在35%～43%，恶性淋巴瘤，对淋巴瘤都相当疗效[10]。在长春新碱因神经系统毒性不能使用时，可作为第二线药物。乳腺癌，单用对晚期乳腺癌的效率为33%。共振瑞利散射作为一种新的分析技术，已经成功应用于生物大分子，如蛋白质，核酸和蛋白多糖-肝素[11]的研究和测定；并开发了一系列测定痕量金属离子[12]、非金属离子以及表面活性剂[13]和水溶性聚合物如聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素钠的研究的新方法；在对液相纳米粒子的分析和表征乙基某些物理-化学参数的测定中得到了新的应用；利用该方法测定药物也进行了初步的探讨，例如，研究了生物碱[14]（黄连素、奎宁、小檗碱等）、氨基糖苷类抗生素、维生素等和一些新药（雷诺昔芬、西地那非）等的分析应用。研究工作取得的积极进展，表明它在药物分析方面具有较大的应用潜力。本文重点考察了RRS光谱法的适宜反应条件及影响因素，方法的选择性和分析应用，探讨了离子缔合物的形成和散射增强的原因。因此发展VDS的痕量测定方法，对于临床医学和药理研究是有其重要意义。本文发现长春地辛在优化条件下可与赤鲜红、虎红和曙红等相互作用，其中与赤鲜红作用最强，反应生成离子缔合物后，导致体系的吸光度增加,?荧光猝灭，以及共振瑞利散射光谱显著增强，且吸光度增加、荧光猝灭、共振瑞利散射增强程度与长春地辛的浓度成正比，据此发展了一种以赤鲜红作探针高灵敏RRS法测定VDS的新方法，这些方法的分析应用均未见报道。1.?实验部分1.1?仪器与试剂F-2500型荧光分光光度计(日本日立公司)，设狭缝宽度5 nm； UV-3010型紫外-可见分光光度计(上海天美公司,)；Ph-S20K型精密pH计(上海梅特勒－托利多仪器有限公司)。长春地辛（山东罗欣制药有限公司，粉针剂）：取5mg溶解并用蒸馏水稀释到100ml的棕色容量瓶中，配制成50mg× mL?-1水溶液的储备液，使用时稀释至10 mg×mL-1的工作液。置于1~ 4oC的冰箱中保存。赤鲜红(AR，北京化工厂)溶液：配制2.5×10-3 mol×L-1水溶液的储备液，使用时稀释至2.5×10-4 mol×L-1水溶液。BR缓冲溶液：用0.04 mol L-1 H3PO4，H3BO3和CH3COOH与0.2 mol L-1 NaOH溶液按一定