SDS法茎瘤芥总DNA提取研究 .docVIP

【标题】SDS法茎瘤芥总DNA提取研究 【作者】袁 凤 【关键词】茎瘤芥? SDS? DNA 【指导老师】江 波 【专业】生物科学 【正文】1. 前言涪陵区是榨菜的发源地和集中产地，被誉为中国的榨菜之乡。因此“涪陵榨菜”为涪陵特产，具有独特的品味和浓烈的地方特色。它与欧洲的酸黄瓜、甜酸甘蓝并称世界三大名腌菜。具有防癌抗癌、下气消食、利尿除湿等各种食疗功能。茎瘤芥（Brassica juncea var. tumida Tsen et Lee）便是“涪陵榨菜”的原料植物。它可以制成各种芥菜鲜销供食，又可进行加工腌制，不仅畅销国内，还可出口国外。其分布范围较广，栽培历史悠久，是我国传统的鲜食和加工蔬菜。目前已经成为重庆蔬菜生产和食品加工行业的一大主要产品，在农业经济中具有重要地位和产业优势。目前前辈们主要从育种、栽培和加工三个方面对茎瘤芥开展研究，从微观分子水平上的研究尚属贫瘠地带。然而要探究“涪陵榨菜”这个地方特色到底是来自于加工工艺还是源于原材料本身，却只能从DNA分子水平上深入研究才会有结论。但是探讨茎瘤芥的分子特性，建立基因文库、进行RAPD鉴定、微卫星标记等分子生物学操作都首先需要高质量的基因组DNA。为获取高质量茎瘤芥的总DNA，开展茎瘤芥基因组总DNA的提取研究便显得举足轻重矣。2. 文献综述茎瘤芥系十字花科芸苔属芥菜种的一变种植物，又名榨菜，俗称青菜头，为双子叶植物纲，十字花科，芸苔属，芥菜种，叶芥亚种，大叶芥变种的变种，二年生蔬菜。原产于我国，以西南、华南、华东等地区栽培最为普遍，种类繁多，品种资源极为丰富。目前对茎瘤芥的研究主要集中在育种、栽培和加工三个方面：在育种方面，数量性状遗传力、遗传变异和遗传进度是作物性状遗传研究的主要内容。通过这些遗传参数的研究，初步揭示和分析茎瘤芥地方品种群体的选择潜力和预期效果，并正确进行选择，提高育种效果，加快新品种、新材料创新进程[1]。在栽培方面，国内研究主要停留在栽培技术[2]和病害的防治[3]两方面：一方面通过品种对比选择优良品种[4]、适地适时播种[5]、合理密植[6]及肥料组合[7]，另一方面通过防治对榨菜原料作物茎瘤芥的危害越来越重的十字花科植物病毒病、根肿病、霜霉病、根腐病、真菌性软腐病和细菌性软腐病[8]，从栽培技术和病害的防治两方面来提高茎瘤芥生产的产量和质量。在加工方面的研究比较多，主要利用传统的腌制技术将榨菜制成高质量、多品种的低盐榨菜和榨菜软罐头以改善榨菜制品的营养价值、安全性和品质，同时可节约生产成本。但是对茎瘤芥的微观分子水平上的研究却很少，而茎瘤芥基因组DNA提取研究又是开展分子水平研究的首要关键一步。目前有关植物基因组总DNA的提取方法已诸多见报，采用的方法主要有两种，即SDS法和CTAB法。所谓SDS是sodium dodecyl sulfate的简称，即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去垢剂，在高温(55℃一65℃)条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，同时SDS与蛋白质和多糖结合成复合物，释放出核酸，使细胞中的核蛋白变性而沉淀下来[9]?，通过这种SDS裂解液提取基因组DNA的方法称为SDS法。邓必建和张霞等学者采用这种方法从针禾属植物羽毛针禾中提取总DNA，并将其和传统的CTAB法提取DNA的结果进行比较分析，结果表明SDS法能得到较纯、较完整DNA并能很好地用于PCR扩增[10]。孙鑫[11]和郭宝生等[12]人改良SDS法，综合了SDS法与CTAB法的优点，获得了高质量的棉花总DNA，完全可用于PCR检测、Southern杂交、RAPD、染色体步移等分子生物学操作。肖军和杨立国和杨涛等以3个菊花品种为试材，利用SDS和CTAB方法提取并经纯化，根据外观、A260/A280比值的测定、DNA产量等进行比较，得到结果CTAB方法提取菊花DNA并提纯后纯度较高，而SDS方法则产量较高,纯度偏低。这样综合了CTAB法与SDS法的优点对提取和纯化菊花总DNA的效果进行了比较和分析，并用此DNA进行了PCR检测[13]。此后，还有学者采用SDS-CTAB法提取了富含多糖的白桦、梨、桃、甘蔗、苦瓜和石榴基因组的DNA[14～19]。2007年谢振文等[20]人利用猕猴桃进行了DNA提取方法的比较研究，结果表明改良SDS法提取DNA的提取率较高。3.SDS法茎瘤芥总DNA提取研究3.1.实验材料和实验仪器3.1.1实验材料本实验所用的材料是从涪陵区农科所采集的茎瘤芥（涪杂1号）完整植株。3.1.2实验仪器3.1.2.1?实验重要仪器电子万用炉子????????????????北京中兴伟业仪器有限公司??????????? DL-1雪花制冰机??????????????????格兰特制冷设备????