流动注射化学发光法测定左炔诺孕酮.doc

【标题】流动注射化学发光法测定左炔诺孕酮 【作者】易永霞 【关键词】化学发光? Ce(IV)-连二亚硫酸钠??左炔诺孕酮??流动注射分析 【指导老师】何树华 【专业】化学教育 【正文】1.引言左炔诺孕酮(Levonorgestrel，简称LNG)是一种甾体激素避孕药[1]。具有强效孕激素作用，并有雄激素，雌激素和抗雌激素活性。主要作用于下丘脑和垂体，使月经中期的促卵泡激素和促黄体生成激素水平高峰降低或消失，使卵巢不能排卵。其抗排卵作用较炔诺酮强，同时还能抑制子宫内膜发育，改变宫颈粘液稠度，使精子不易进入宫腔，而达到避孕目的[2]。国产α-甲基炔诺酮硅橡胶皮下埋植剂为新型长效缓释制剂,埋植于妇女上臂内侧皮下,能长期以恒定速度向体内释放孕激素,达到避孕目的[3]。目前,测定左炔诺孕酮含量的方法主要有：高效液相色谱法(2005版药典标准方法)[1]，紫外分光光度法[4]，荧光法[5]等。高效液相色谱法仪器昂贵，操作繁琐，费时长。紫外分光光度法灵敏度低。利用流动注射化学发光法测定左炔诺孕酮,文献中未见报道。化学发光法因其具有灵敏度高，线性范围宽，仪器简单，操作方便，分析成本低，易与流动注射技术联用等优点，近年来被广泛地应用于药物分析[6-18]。本文研究发现，在酸性条件下, Ce(IV)氧化连二亚硫酸钠产生较弱的化学发光，左炔诺孕酮对该发光有显著的增强作用，且增加的发光强度与左炔诺孕酮的浓度在0.03~0.3mg.L-1和0.5~3mg.L-1范围内呈良好的线性关系。基于此，并结合流动注射技术建立了一种快速，灵敏，简单的测定左炔诺孕酮的新方法。本方法的检测限为0.013mg.L-1。对0.8mg.L-1左炔诺孕酮平行测定11次,其相对标准偏差仅为2.9%。该法用于左炔诺孕酮片剂含量的测定,结果令人满意。2.实验部分2.1仪器和试剂BPCL超微弱化学发光仪（中国科学院生物物理研究所）；惠普Victra 4电脑；HL-2恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）。左炔诺孕酮标准溶液5mg.L-1：准确称取左炔诺孕酮标准品（中国药品生物制品检定所）5mg?加二次水超声振荡溶解，并定容至1000mL棕色容量瓶中备用；4mol.L-1硝酸储备液;0.05mol.L-1Ce(IV)储备液；0.01mol.L-1连二亚硫酸钠。所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.2实验方法按图1所示流路安装好仪器，开启蠕动泵，将各管道依次通过稀硝酸、二次蒸馏水清洗干净，插到相应的溶液中，开启化学发光分析仪和IFFM分析系统，仪器测量参数负高压设为-950V，增益设为2，蠕动泵流速调为6.0mL.min-1的情况下开始测量，待基线稳定后，将流通阀中的样品溶液注射到硝酸、Ce(IV)-连二亚硫酸钠的混合液中，记录反应的发光强度，以增加的光强ΔI定量。??图1?流动注射化学发光测定左炔诺孕酮示意图Fig.1 Schematic diagram of the flow injection system for the determination of LevonorgestrelP:?蠕动泵（Peristaltic pump） V:?六通阀（valve） F:?流通池（flow-cell） D:检测器（detector）3.结果与讨论3.1条件选择3.1.1 Ce(IV)浓度对发光强度的影响考察了0~4mmol.L-1范围内不同浓度Ce(IV)对发光强度的影响，发现开始发光强度随Ce(IV)浓度增加而增大，但当Ce(IV)浓度超过1mmol.L-1时，发光强度反而降低(如图2)，因此在以后的实验中Ce(IV)浓度选用1mmol.L-1度。(levonorgestrel：0.3mg.L-1，HNO3：0.3mol.L-1，Na2S2O4：0.3mmol.L-1，-950V)图2 Ce(IV)浓度对化学发光强度的影响Fig.2 Effect of Ce(IV) concentration on the increase CL intensity3.1.2酸及其浓度对发光强度的影响酸的浓度对Ce(IV)-连二亚硫酸钠体系发光强度也有影响，当酸浓度太小，体系灵敏度不高，当酸浓度过高，基线飘逸严重，且对体系发光有抑制作用。试验了0~0.5mol.L-1范围内的硝酸对发光强度的影响,发现硝酸的佳浓度为0.3mol.L-1。图3硝酸浓度对化学发光强度的影响(levonorgestrel：0.3mg.L-1，Na2S2O4：0.3mmol.L-1，Ce(IV)：1mmol.L-1，-950V)Fig.3 Effect of nitric acid concentration on the in