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附录Ⅺ H 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他 品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检 验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域 内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的 措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医 药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁 净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查 的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基 培养基的制备及培养条件 培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配 制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在 2 ℃～ 25 ℃、避 光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般 可在一年内使用。 1. 硫乙醇酸盐流体培养基 酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0 ml 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g (或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 水 1000 ml 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮 沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为 7.1 ± 0.2 。 分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉 红色）不超过培养基深度的 1/2 。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不 1 得超过培养基深度的 1/5 ，否则，须经 100 ℃水浴加热至粉红色消失（不超过 20 分 钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。 硫乙醇酸盐流体培养基置 30 ℃～ 35 ℃培养。 2.改良马丁培养基 胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g 酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁 0.5g 葡萄糖 20.0g 水 1000 ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 值约为 6.8 ，煮沸，加入葡 萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节 pH 值使灭菌后为 6.4 ± 0.2 ，分装，灭菌。 改良马丁培养基置 23 ℃～ 28 ℃培养。 3.选择性培养基 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或 使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。 4.营养肉汤培养基 胨 10.0g 氯化钠 5.0g 牛肉浸出粉 3.0g 水 1000 ml 取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，调节 pH 值使灭 菌后为 7.2 ± 0.2 ，分装，灭菌。 5.营养琼脂培养基 按上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入 14.0g 琼脂，调节 pH 值使灭菌后为 7.2 ± 0.2 ，分装，灭菌。 6. 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等