伊文思蓝与牛血清白蛋白和血红蛋白的相互作用研究.docVIP

【标题】伊文思蓝与牛血清白蛋白和血红蛋白的相互作用研究 【作者】熊 晓 毅 【关键词】伊文思蓝??牛血清白蛋白??牛血红蛋白??荧光猝灭??相互作用 【指导老师】曹 团 武 【专业】环境科学 【正文】分子间的相互作用，尤其是药物小分子与生物大分子间(血清白蛋白、血红蛋白等)相互作用的研究，已逐渐成为化学、生命科学和医药学等学科研究领域中最为活跃的前沿和热点之一[1]。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白,药物进入血浆后,首先与血清白蛋白结合,然后再被运送到身体的各部位。随着药代动力学及临床药理学迅猛发展,药物-蛋白质结合对药代动力学影响,又有了更深刻的认识。血红蛋白(hemoglobin)是动物体内血液的重要组成部分，它除可以作为血液缓冲物质而发挥作用外，还担负着输氧的重要生理功能[2]。血红蛋白是一种相对分子质量为64500的水溶性蛋白质，具有4个亚单元的聚合体。每个亚单元由一条蛋白质链和一个血红素分子组成。血红素同肽链的连接是血红素的Fe的第五配位位置以配位键与肽链分子中的组氨酸咪唑基的氮原子相连，第六配位位置可同氧或其它小分子结合。其等电点为4.7～4.9。伊文思蓝(Evans Blue)，又称伊文思兰；蓝色结晶，有绿色金属光泽；能溶于水、醇、酸和碱；有吸湿性，不溶于四氯化碳、氯仿和乙醚；在PH值近于10时变色，能被强氧化剂和还原剂破坏；加入中性盐溶液析出沉淀，水溶液较为稳定。本品为生物染色剂，用于测定血浆和血容量，也可作为动脉插管（化疗）时定位用。副作用有连续注射本品3次以上，皮肤可出现色斑，约6周后消失；制剂为注射剂。?药物进入人体后总要通过血浆蛋白的存储和运输达到受体部位发生药理作用，并在不同温度、酸度的条件下测定邻苯二酚紫对蛋白质的相互影响及其相互作用机理。研究药物与血清白蛋白之间的作用，有助于了解药物在体内的运输和分布的情况，对于阐明药物的作用机制、药代动力学以及药物的毒性都有非常重要的意义[3]。分子荧光研究小分子物质与牛血清白蛋白的相互结合作用已有文献报道[4-10]。????由于蛋白质可以和许多内源性和外源性化合物结合，通过形成复杂的化合物来完成血浆的功能。药物进入人体后，只有通过血浆的贮存和运输，才能达到病灶部位，发挥药效。随着科学技术和方法的引入，这方面的研究内容与方法也在不断深入[11]。近代主要的研究方法有：??? 1、光谱方法????药物与生物分子的相互作用研究，荧光光谱法是应用广泛的重要手段，它具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便等优点。近年来，在荧光猝灭法的基础上，同步荧光法和三维荧光光谱法等新技术也发挥着重要的作用。紫外—可见光谱法也是研究药物分子也蛋白质的相互作用机理最常用、最方便的方法。同时，共振拉曼光谱、红外光谱等光谱方法也应用于药物与生物大分子相互作用的研究。2、热量法生物体新陈代谢的实质就是在有机体内的一系列化学反应，在这些过程中，有一部分能量不可避免会以热效应的形式表现，利用微量热手段对这些热效应做精密的测量与详细的讨论，就构成了生物化学热力学的研究内涵。此外，量热法对被研究体系的溶剂性质、光谱性质以及电化学性质等没有任何条件的限制，因而有独到之处。常用的微量热法有常规量热法和差示扫描量热技术(Differential Scanning　Claorime-try，DSC)等，已经用于药物分子与蛋白质的相互研究中。3?核磁共振(NMR)技术　NMR是两种能够测定生物大分子三维空间结构的技术之一，是研究生物大分子的溶液结构、动力学及分子相互作用的重要工具。特别是在蛋白质的动力学方面，NMR技术具有其他技术无法比拟的优越性，可以在接近生物大分子的生理环境(温度、盐浓度、pH值等)下对其溶液进行研究，因而得到的结果更具有说服力。近年来，随着NMR技术的飞速发展，对其研究的生物大分子分子量的限制也从10KDa以下提高到25Kda，同时，利用这一技术研究生物大分子动力学的方法也有了较大突破。NMR测定蛋白质结构的方法包括四大基本要素：结构测定的主要NM参数NOE?(nuclear overhauser effect)距离测定；核磁谱峰序列专一性归属；NMR结构计算及结构评价；数据收集的多维NMR技术。　4、其它方法电化学方法虽然在一定程度上受到电活性与否的限制，但对于吸收光谱比较弱、电子跃迁谱带与大分子吸收重叠的组分，无法用吸收光谱法研究的分子，却能用直接伏安法进行研究。此外，平衡渗析、粘度测定以及离心超过滤、高效液相色谱、微渗析、质谱、毛细管电泳等方法也应用于药物与蛋白质分子相互作用的研究。荧光的猝灭机理以及由荧光法确定蛋白质分子与药物分子的结台常数，荧光的碰撞猝灭可由Stern-Volmer方程描述[12]????????