流动注射增强鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光法测定青霉素钠.docVIP

【标题】流动注射增强鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光法测定青霉素钠 【作者】喻离念 【关键词】?化学发光，流动注射分析，青霉素钠 【指导老师】石文兵 【专业】化学教育 【正文】1 引言青霉素钠（如图1）是目前临床应用最广泛的?-抗生素，其含量测定方法由最初的微生物法、羟胺法逐渐发展为目前的碘量法[1]、咪唑分光光度法[2]、酸碱滴定法[3]和硝酸汞电位滴定法[4]，紫外分光光度法[5，11，14，15]，色谱法[7，8，13]，其他方法还有比色法[9]和酶分析法[10]。碘量法是由于青霉素在碱性条件下，能水解生成青霉素唑酸，与碘进一步作用，根据所消耗的碘量，算出青霉素的含量。?虽然灵敏度较高，但温度反应条件对结果影响很大；咪唑紫外分光光度法是青霉素在1.2 mol/L浓度咪唑催化下，在含有10-3mol/L浓度的氯化汞的pH6.8?0.05溶液中，于60℃定量形成稳定的青霉烯硫醇汞盐，根据此产物在波长325~345 nm范围内最大吸收的原理，进行含量测定，其结果准确，精密度好，易于掌握，但操作繁琐并需要用标准品。酸碱滴定法（又称中和法）是利用青霉素在碱性条件下其?-内酰胺环被破坏，水解生成青霉素噻唑酸，同时定量消耗氢氧化钠的原理，在一定PH条件下，加入定量而过量的碱，经加热反应后，用标准盐酸液回滴剩余的碱，根据消耗碱的量算出青霉素含量，其操作简便，不需用标准品，但样品中残留的酯能消耗碱，样品水解时温度过高或样品本身质量较次时，均会使被测溶液变黄，干扰终点的判断，而且样品水解加热后，极易吸收二氧化碳进而消耗碱液。硝酸汞电位滴定法受时间、温度的限制,?干扰因素较多，对环境污染较大，不适应大工业生产的需要；紫外分光光度法灵敏度低，线性范围窄；高效液相色谱法仪器设备昂贵，不容易普及。化学发光测定青霉素类药物已有报道[6]，比如Yuanyuan Sun等用鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光法测定苯氧甲基青霉素钾、氨苄青霉素、氨苄青霉素钠、阿莫西林。其原理都是这些药物有增强鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光，这四种药物的线性范围均为0.1-1.0??g/mL，检出限均为0.05??g/mL，相对标准偏差分别为4.4%，0.8%，2.1%，1.1%，回归方程的相关系数均在0.99以上，方法具有较好的检测能力。?建立简单、快速、准确测定青霉素钠的含量的新方法在药物含量监测和药物合成中完全可以克服硝酸汞电位滴定法、紫外分光光度法、高效液相色谱法的弱点。试验研究发现，青霉素钠有增强鲁米诺-铁氰化钾体系发光的作用。并且在一定的浓度范围内青霉素钠的浓度与化学发光的强度成正比。再者，化学发光具有灵敏度高、线性范围宽、操作简单、仪器设备便宜，流动注射技术具有快速、方便、准确的特点。据此，建立了流动注射化学发光法测定青霉素钠含量的新方法。已成功用于粉针剂和合成样品中青霉素钠含量的测定，结果令人满意。?图1青霉素钠的分子结构2． 实验部分2.1仪器和试剂流动注射系统（如图 2）：P1蠕动泵泵送所有的试剂（3.6 mL/min?，单管），P2蠕动泵泵送水载流（3.6 mL/min?，单管）；聚四氟乙烯管（内径0.8 mm?,?用于连接阀及流路中的泵管）；八通阀用于注射样品及其它工作试液（进样量为130?μL）；化学发光信号由IFFLD-型流动注射化学发光仪（西安瑞科电子设备有限公司）捕获；信号值由REMAX工作软件处理和记录。青霉素钠（分析纯，山东瑞阳医药有限公司）储备液：准确称取50 mg青霉素钠溶解于100 mL的容量瓶中，用二次蒸馏水稀释至刻度配成500?μg/mL的储备液，需要时用二次蒸馏水稀释至所需浓度；铁氰化钾（分析纯，重庆东方试剂厂）：用二次蒸馏水配成1×10-2 mol/L的储备液；鲁米诺（MerckMerck?公司,?德国进口）；用0.01 mol/L的氢氧化钠溶液配成0.01 mol/L储备液，需要时用5?10-3 mol/L?的NaOH溶液稀释至所需刻度；其余试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。图 2?测定青霉素钠的流动注射装置示意图a.二次蒸馏水；b.5.0?10-5mol/L?铁氰化钾； c.4.0?10-5mol/L?鲁米诺在5.0?10-3 mol/L NaOH溶液；?S.样品；P1, P2.蠕动泵； V.注射阀；F.流通池； W.废液； D.PMT； PC.个人电脑。2.2实验方法2.2.1??标准曲线的绘制：准确移取一定体积的青霉素钠标准储备液（500?μg/mL）于一系列25 mL具塞比色管中，配制成浓度为0.01~15?μg/mL系列溶液。按照图2装置装好流路，开启蠕动泵（泵速30 r/min），待基线稳定后进样进行测定，以峰高定量。2.2.2.??合成样品的测定：向一定量的青霉素钠中加入不