【毕业论文】基于12srRNA与16srRNA的鹿科分子系统研究.docVIP

【标题】基于12srRNA与16srRNA的鹿科分子系统研究 【作者】伍 莎 【关键词】白唇鹿??鹿科动物? 12srRNA基因? 16srRNA基因??序列分析??系统发育关系 【指导老师】吴少斌 【专业】生物科学 【正文】1?引言白唇鹿(Cervus albirostris)，俗名白鼻鹿、黄鹿、红鹿、青鹿、哈马，属于偶蹄目，反刍亚目，鹿科，是中国特有种，没有亚种分化。在国内主要分布于甘肃、青海、四川、西藏的森林、灌丛、草甸中，为国家一级重点保护动物、IUCN易危物种?(VU)，中国珍稀动物红皮书列为渐危物种(Vulnerable)。白唇鹿几千年来只栖身在中国3500米高的严寒地带，也是惟一生存在高原的大型鹿类。但是，白唇鹿大约在更新世晚期就生活在喜马拉雅山一带，这里以前曾经是茂密的森林，后来，地壳上升，气候变冷，白唇鹿的范围东移，最后在高原的边缘地带顽强的适应下来，进化成今天的模样。因此，研究白唇鹿，对了解整个鹿类的进化系统有着相当重要的意义。鹿科动物[1]，有40种，在反刍动物中是物种数居第二的科，仅次于牛科动物[2]。活着的代表包括旧大陆鹿类(Cervinae)、亚洲的麂和毛冠鹿(Muntiacinae)、驼鹿和驯鹿，新大陆的空齿鹿属物种和旧大陆的狍(Odocoileinae)，和无角的单种属物种獐(Hydropotinae)[3]。作为北半球温和地带生活的反刍动物，这类高度分化的群体进化着，象其麝类祖先一样保留着森林生活栖息的习性。在大小、栖息地、行为等方面高度分化，鹿科动物因一系列的同源性状组合在一起，包括雄性有角等[1]。在Grubb[2]的分类体系中，Cervidae鹿科16个属被分为4个亚科，即鹿亚科Cervinae、麂亚科Muntiacinae、獐亚科Hydropotinae和空齿鹿亚科Odocoileinae。鹿亚科Cervinae包括4个属（黇鹿属Dama、花鹿属Axis、麋鹿属Elaphurus、鹿属Cervus），麂亚科Muntiacinae包括2个亚洲属（麂属Muntiacus 9个种、单种的毛冠鹿属），獐亚科Hydropotinae仅包括无角的獐（中国），空齿鹿亚科Odocoileinae包括较多的不同种类，有9个属（驼鹿属Alces、驯鹿属Rangifer、狍属Capreolus、空齿鹿属Odocoileus、短角鹿属Mazama、南美泽鹿属Blastocerus、马驼鹿属Hippocamelus、草原鹿属Ozotoceros、普度鹿属Pudu）。麂属Muntiacus是一个单系群[4-5]；鹿亚科 Cervinae是一个单系群，也得到D-loop和 Cyb?等基因分析的支持[6-11]。獐亚科Hydropotinae?仅有一个物种獐（Hydropotes inermis）；空齿鹿亚科 Odocoileinae是问题最多的一个分类，属间关系的争议特别多，空齿鹿亚科 Odocoileinae是否为单系群遭到Grubb[2]质疑。同时，各亚科和属间的关系仍存在许多不一致的看法。虽然用一些方法对鹿科动物的进化关化进行了大量的研究，这些研究涵盖了世界大多数鹿科动物之间的系统发生关系，包括形态学[12]、线粒体和核DNA[9-10,13-17, 19]，以及氨基酸序列血纤维蛋白肽[20]、核糖核酸酶[21]，但是关于它们的进化历史和分类地位仍然有大量不清楚的地方，特别是对于中国白唇鹿与其它鹿科动物之间的系统发生关系，国外学者研究较少。?近年来，分子生物学技术已广泛应用于物种问系统发生关系的研究上，其中快速进化的线粒体DNA，尤其是线粒体上RNA基因序列，更成为研究哺乳动物系统发生关系最常用的工具。它的部分或者全部序列被广泛地应用于动物类群的系统系统发生分析中。但是以12srRNA与16srRNA构建鹿科的进化关系，探讨鹿科动物之间的系统发生关系，尚未见报导。为了保护野生的鹿，以采自唐家河自然保护区的白唇鹿肌肉样品进行分子进化关系的研究，结合鹿科动物的同源序列，探讨鹿科12srRNA与16srRNA的结构，构建分子系统树进行系统发生分析，以便为进行稀鹿种的驯养、繁殖和探讨中国白唇鹿与其它鹿科动物之间的系统发生关系以及相关物种之间的分子克隆提供分子依据。2?材料与方法2.1实验材料2.1.1?样品采集???实验用的肌肉样品采自中国四川省唐家河自然保护区，该样品从死亡白唇鹿(Cervus albirostris)上切下后用无水乙醇浸泡并置于?80°C的超低温冰柜中保存。2.1.2?主要试剂裂解液（含10 mmol/L Tris-Cl pH 8.0， 0.1 mol/L pH 8.0 EDTA，0.5?% SDS）、缓冲溶液（含2 mol/L Tris 24.2 g