【毕业论文】刚果红共振瑞利散射法测大观霉素的含量.docVIP

【标题】刚果红共振瑞利散射法测大观霉素的含量 【作者】邱 明 凤 【关键词】?????共振瑞利散射法??大观霉素??含量测定 【指导老师】庞 向 东 【专业】化学 【正文】1?引言大观霉素(spectinomycin)?（结构式见图1）是一种由大观链霉菌(Streptomyces spectabilis)产生的氨基糖苷类抗生素，是一新型特效专治淋病的抗生素，对淋病奈瑟菌有较强的抗菌作用，临床上主要用于淋球菌所致的尿道炎、急性淋病、直肠炎、子宫颈炎等。目前大观霉素以代替青霉素作为治疗急性淋病的首选药物。此外，大观霉素的抗菌谱广和低毒性也使它作为饲料添加剂，以提高农作物产量或促进牲畜生长。?近年来，由于性传播疾病在我国呈上升趋势，其中以淋病的发病率最高，相对于渠道复杂而且价格昂贵的同类药品，大观霉素更具有安全和价格优势，因而国内临床上的需求量不断增加。共振瑞利散射作为一种新的分析技术,因其灵敏度高、使用简便和应用面广而引起了人们的广泛关注。这种分析方法已在蛋白质、核酸、药物分析、临床检验、化工生产、生物医学科学及金属离子测定的研究中得到广泛的应用。所以，对大观霉素药物进行分析研究，在药品检测与临床的扩大应用方面，更好的使用大观霉素具有深远的意义。????共振瑞利散射(RRS)技术具有灵敏度高、简便、快速等优点，近年来应用范围越来越广泛。但是到目前为止，该方法在大观霉素含量测定的应用方面尚未见报道。因此研究灵敏度高、选择性好的测定大观霉素的共振瑞利散射法有重要的意义。本实验采用刚果红为染料来进行研究，建立用共振瑞利散射法测定大观霉素的新方法。?????????????????图1???大观霉素结构式2?实验部分2.1主要试剂及仪器大观霉素标准溶液：配制1.0×10-5mol/L的大观霉素储备液，冰箱保。Tris-HCl系列缓冲液（pH=2.02-9.38）：0.1mol/L的HCl和0.2mol/L的Tris溶液混合，用酸度计测定，配成不同pH值的缓冲溶液。刚果红溶液：配制成1.0×10-4mol/L的水溶液（中国上海试剂三厂）。以上药品和试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。日立F-2500型荧光分光光度计，pH酸度计(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。2.2?实验方法于10mL干燥的比色管中，分别加入2.0 mL 1.0×10-4mol/L的刚果红溶液，一定量的 1.0×10-5mol/L的大观霉素溶液，然后再加入1.0mL的pH值分别为2.02、2.87、3.14、4.32、5.0、8.17、9.38的Tris-HCl缓冲液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在F-2500型荧光分光光度计上，采用狭缝5nm，以λem=λex=0对以上溶液进行同步扫描，可得共振瑞利散射光谱，然后于最大共振瑞利散射峰（λmax）处测定体系的散射光强度IRRS和试剂空白强度I0，△I=I?- I0?。3?结果与讨论3.1共振瑞利散射光谱在△λ=0nm处分别对大观霉素标准溶液、刚果红溶液和反应产物溶液进行同步扫描，记录RRS光谱。结果表明：大观霉素溶液在适宜酸度的Tris-HCl缓冲液中，与适量的刚果红溶液反应后使体系的RRS显著减弱，并产生了一种既不同于刚果红也不同于大观霉素的新的RRS光谱（图2），其最大散射波长为370nm，大观霉素的浓度在0.0-0.33ug/mL范围内与RRS强度呈良好的线性关系（图3）。?3.2?适宜的反应条件3.2.1?溶液酸度的影响???此体系是在2.0mL 1.0×10-4mol/L的刚果红和1.0mL 1.0×10-5mol/L的大观霉素标液的条件下，取pH值不同的Tris-HCl缓冲溶液进行试验。经过多次实验，实验中溶液酸性越强，所得体系的峰值越高，但酸性越强体系和染料与缓冲的峰值高度相当，通过多次实验表明结果表明当在缓冲溶液的pH=2.02的条件下其体系的峰值和染料加缓冲的峰值有较大差距，本实验用pH=2.05的缓冲液控制溶液的酸度（图4）。????????????????????????????????图4????溶液酸度的影响3.2.2?缓冲溶液用量的影响此体系在2.0mL 1.0×10-4mol/L的刚果红和1.0mL1.0×10-5mol/L的大观霉素标液的条件下，选用pH为2.02的Tri-HCl缓冲液，分别加入缓冲液的用量依次为0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于6支比色管中，经优化后的实验结果表明，当缓冲溶液用量为1.0mL时IRRS值为最佳，因此本实验用1.0mL的缓冲溶液（图5）。???????????????????????????图5??