[武汉大学基因工程（李立家）课件]题目1.docVIP

《基因工程》考试题 生命科学学院 题目： 名词解释 1、同尾酶 2、接合型质粒 3、质粒的不亲和性 4、穿梭质粒载体 5、溶源生长周期 6、插入性载体 7、人工染色体 8、DNA变形 9、增色效应 10、杂交 11、核酸探针 12、基因文库 13、凝胶层析 14、电泳 15、目的基因 二、简答题 1、表达载体应该具备的条件 2、柯斯质粒载体的优点 3、影响复性的条件 4、真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？ 5、将外源性DNA克隆到(-LacZ区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？ 6、如何有效地提高外源基因的表达效率？ 7、大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？ 8、分子标记的特点 基因芯片技术的主要特点 10、酵母双杂交系统的优点 参考答案： 名词解释 同尾酶：来源不同的限制性内切酶，识别的靶序列各不相同，但都能形成相同的粘性末端，这类酶互称为同尾酶，这种现象也称为末端匹配。 接合型的质粒：又叫自我转移的质粒。它们除了具有自主复制所必须的遗传信息之外，还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因 质粒的不亲和性：有时也称为不相容性，是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象。在细胞的增殖过程中，其中必有一种会被逐渐地排斥(稀释)掉。这样的两种质粒称为不亲和质粒 穿梭质粒载体：是指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活和复制的质粒载体 溶源生长周期：是指在感染过程中没有产生出子代噬菌体颗粒，噬菌体 DNA是整合到寄主细胞染色体 DNA上，成为它的一个组成部分。具有这种溶源周期的噬菌体，叫做温和噬菌体。 插入型载体：通过特定的酶切位点允许外源 DNA 片段插入的载体称为插入型载体 人工染色体,是指一类能在生物细胞中独立、稳定存在和遗传的人工重组DNA分子,人工染色体应具备三种功能元件的类似组份:复制起始点、着丝点、端粒 DNA变性：是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团 增色效应：变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露，260nm紫外吸收值因而增加 10、杂交：来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互补形成异源双螺旋分子，称为核酸分子杂交。 11、核酸探针：是指带有某些标记物的特异性核酸序列片段 12、基因文库：又称DNA文库，是指某个生物的基因组DNA片段或cDNA与适当的载体在体外重组后，转化宿主细胞，通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落(或噬菌体)，所有菌落或噬菌体的集合即为该生物的基因文库。 13、凝胶层析：又叫分子筛层析：分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。 14、电泳：是指带电粒子在直流电场中移动的现象。 15、目的基因：又叫靶基因，是指根据基因工程的目的,设计的所需要的某些DNA分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码 二、简答题 1、表达载体应该具备的条件 答：①载体能够独立地复制 ②具有方便、灵活的克隆位点和筛选标记 ③具有能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别的强启动子 ④启动子应可受诱导调控。 ⑤具有强终止子，防止“通读”现象。 ⑥具有翻译的起始信号 2、柯斯质粒载体的优点 答：（1）cosmid克隆载体结合了质粒克隆载体和λ噬菌体克隆载体的优点 （2）具有克隆大片段外源 DNA 的能力，柯斯质粒本身一般只有 5-7kb 左右，而它可克隆外源 DNA 片段的极度限值高达 45kb ，远远超过质粒载体及λ噬菌体载体的克隆能力。这是其最大优点。 （3）克隆载体上含有一个COS位点，在A蛋白作用下COS位点被切开，提供体外包装必需的COS末端,具有噬菌体的高效感染力 （4）具有质粒 DNA 的复制方式，重组 DNA 注入宿主细胞后，两个 cos 位点连接形成环状 DNA 分子，如同质粒一样进行复制 ，不形成子代噬菌体 （5）具有与同源序列的质粒进行重组的能力 3、影响复性的条件 答：（1）单链核酸的起始浓度：反应开始时的总浓度可直接影响单链分子碰撞的几率，浓度越高，复性越快。 （2）核酸链长度（分子量）：分子越长，扩散越慢，形成配对的难度也大，复性也慢。 （3）核酸分子的复杂性：复杂性即核酸分子中不同序列的总长度，复杂性越高，形成正确配对的难度也越大，复性越慢。 （4）温度：温度过高有利于变性；过低则分子运动减慢，少数碱基形成的局部双链也不易解离。适宜的复性温度是比Tm低25℃。