肝癌组织中三个MAGE家族基因的克隆.pdfVIP

肿瘤 物治疗杂志 1999J 0dI un；6(2)：87～90 tJ e Biother … … … … — 87 肝癌组织 中三个 MAGE家族基 因的克隆 刘彬彬 叶胜龙 贺 平 汤钊猷 (上海医科大学中山医院肝癌研究所 上海 2(30032) — — — — 一 R 3 ’ 。卜 乏){。f、 摘 要 目的：从肝癌组织中克隆肿瘤相关抗原基 因MAGE-I的全长 eDNA，为该基因及其编码抗原应用于肝癌 的免疫治疗奠 定基础。方法：根据MAGE-1编码区上 、下游序列设计一对引物 ，用 RT-PCR方法从肝癌组织中扩增该基 因的全长 cDNA． 酶切 产生粘性末端后连接入 PUCI9质粒。经初步酶切鉴定后，通过DNA序列分析获取所克隆基因片断的棱苷酸序列。结果 ：成功 地克隆了MAGE-1基因的全长 eDNA，同时还获得一约750bp的MAGE-3基 因片段及一与MAGE-6和 M．AGE-12高度同源的基因 的克隆。此与 MAGE-6，-12高度同源的基因可能为一未知 地 E家旗成员 。结论 ：肝癌组织 中表达多种 MAGE家族基 因． 甚至 可能存在未知 MAGE家族基因的表达 ，这将为寻找肝癌免疫治疗的攻击靶点开辟新 的途径。 关键词 — 里 里；墨 ‘中国图书资料分类法)分类号 R7357：面3051 CloningofThreeM AGE Genesfrom HepatocellularCarcinoma Binbin，YeShenglong，lieP，lg，TangZhaoyou(LiverCancerInstitute，ShanghaiMedicalUniversi— ty，Shanghai200032) Abstract Objective：ToclonethefullleitheDNAofhtetumor叫eetino geneNAGE一1fromhepatocellularcarcinoma (HCC)tissues．ThisMAGE一1geneandhtetumor叫eetionantigen∞∞dedbyitmaybeusefulinsthtc,equentstudies ai1她 atexploringnewstrategiesforhtemmamohterapyforHCC Methods：The叫 lengthMAGE-1eDNAWO*Sampli— fledbyffr-PCR methodusing apairofprimersdesignedaccordingtohteenocding sequenceofMAGE-1gene．ThePCR productswe htendigestedbyrestrictionendonuelessesand insertde intohteplasmidPUC19．Afterprirrmy selectionof htereeomhinantsbyendnoucleasedigesticaa，the sequencesoftheinsertde generfagmentswereocnfirmedbyDNA se— quenceanalysis．Results：Using the$~qrtiepairofprimers，weobtainedthreeclno esofdifferentMAGE genes ，which wereafitlllength MAGE-1gene，a750bpfragmentofMAGE-3genena dagneehighlyhomologoustoMAGE-6na d MAGE-12butnotidenticaltoanyreportedMAGE genes．0∞dⅢdlI玎：Thesedatasuggestde htat80meMAGE genes are epxressed inheptoeellularcarcinomaprobablyincluding sometlltk_qowligenes，whichmightintroducepo tentialnew tar- getsforimli1uneattacks． Keywords hepatocellularc~ moma ；MAGE；inmat