细胞培养基本知识.ppt

一． 细胞（组织）培养的概念及意义（一） 细胞的基本知识1． 细胞及细胞学说的提出：1665年英国学者Robert Hooke，用自制的显微镜观察软木的薄片，第一次发现植物的细胞结构，并首次借用拉丁文Cella（小室）这个词称呼他们看到的类似于蜂巢的极小的封闭小室。 德国植物学家施莱登（１８３８. Ｍ.Ｊ　Ｓchleiden），动物学家施旺（１８３９，T.schwann）提出动植物都是细胞的集合物。使细胞及其功能有了一个较为明确的定义，确立了“细胞学说”的基本原则。这时细胞学说主要内容是：（１）细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的；（２）每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己的生命。（３）新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。 　　１８５８年德国医生病理学家微耳赫（Virchow）指出细胞只能来自细胞，正如动物只能来自动物，植物只能来自植物一样。他还指出机体的一切病理表现都是基于细胞的损伤。施旺、施莱登的细胞学说，1859年达尔文(Darwin)的进化论，1866年孟德尔（Mendel）的遗传学定为现代生物学的三大基石，而细胞学说又是后二者的基石。 2． 细胞的基本概念（1） 细胞是生命活动的基本单位：细胞是生命活动的基本单位，一切机体均由细胞构成（病毒是非细胞形态的生命体）。细胞不仅是机体的基本形态结构单位，也是机体的基本功能单位，机体的生长、发育、繁殖和进化都是以细胞为基础。细胞同时也是机体发生退行性变与发生疾病的基础。 （2） 细胞的基本共性：构成细胞的基本化学因素只有O、C、H、N、P、S、Ca、K、Fe、Na、Cl、Mg等，它们构成细胞功能与结构所需的许多无机化合物和各种生物分子。构成细胞结构的基本生物大分子是：核酸、蛋白质、脂肪和糖类。这些大分子一般以复合分子形成如核蛋白、脂蛋白、糖蛋白或糖脂等组成细胞的重要结构。 在亚显微结构水平上，细胞基本结构大体可以分成三种体系：主要由脂蛋白构成的生物膜系统，如细胞膜、核膜及一系列重要细胞器如：线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体和液泡等的封闭膜；第二类主要由核酸蛋白成分构成的颗粒与显微结构系统，如染色质与核仁基质，核蛋白体等；第三类由蛋白质构成的细胞骨架（主要是微丝与微管），中心体、纺锤体、纤毛、鞭毛等专门结构。 （3） 细胞作为生命活动的基本单位的共同特点： 首先所有细胞 表面均有一层脂蛋白成分的生物膜，即细胞膜，使细胞能与周围环境保持相对独立性；其次，所有细胞都有两种核酸，即DNA和RNA作为遗传信息的复制和转录的物质基础；第三作为蛋白质合成的“机器”-核蛋白，是一切细胞不可缺少的基本结构；第四所有细胞都是以一分为二的分裂方式增殖。第五，细胞具有多样性，形状、大小悬殊很大，结构复杂程度也很不一样。 （4） 原核细胞与真核细胞：这两种细胞是根据进化程度与结构的复杂程度来划分的。原核细胞（Procarytic cell）它没有典型的核结构，没有核膜，只有一个比较集中的核区，其中分布着环状DNA丝，细胞内缺少重要细胞器，但有时有核蛋白体及游离的质粒（Plasmid），原核细胞的繁殖以直接分裂（无丝分裂）为主，DNA复制、RNA转录与蛋白质合成同时连续进行。 从进化角度真核细胞与原核细胞有两点区别，第一细胞膜系统的分化与演变不同。真核细胞以膜系统的分化为基础，分化成各种重要的细胞器；第二遗传信息与遗传装置的扩增与复杂化程度不一。真核细胞（Eucaryotic cell）进化程度高，结构相当复杂。 （二） 组织（细胞）培养1． 组织（细胞）培养的概念和进展： 组织（细胞）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法 。 本世纪初（1907年）美国科学家Harrison和carrel创建的，以淋巴液为培养基在试管内成功的培养了蛙胚神经组织。50年代人们在培养容器、培养液及技术操作上都进行了大的改进，使细胞培养进入一个突飞猛进的发展阶段。70-80年代，随着遗传缺陷细胞株的培育，杂交瘤技术制备单克隆抗体，癌基因转染及基因工程出现，使细胞培养技术不仅用于研究生命科学，也成为生物工程和基因工程的生产手段。 2． 组织（细胞）培养选材：根据实验目的，观察指标决定组织（器官）或是单个细胞。细胞培养是用剪碎的小组织块或分离的单个细胞进行培养，这种培养将会失去原有组织类型及某些生化特性，但它们可以增殖，可以特性化，可以获得遗传背景相同的群体，可以保存。培养选材一般来自胚胎组织的培养物比成体组织更易生存、生长，这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎干细胞（ESC）它们具有更高的自我更新和多能分化的能力。 3． 原代与传代培养：原代培养一般指细胞从组织中分离在