冬枣乙醛脱氢酶基因的克隆 与植物表达载体构建.docVIP

  冬枣乙醛脱氢酶基因的克隆 与植物表达载体构建# 林星谷1,2,3，庞晓明1,2,3** 5 10 15 20 25 30 35 40 （1. 北京林业大学林木育种国家工程实验室； 2. 林木花卉遗传育种教育部重点实验室； 3. 计算生物学中心，北京 100083） 摘要：醛脱氢酶( Aldehyde dehydrogenase, ALDH )可以将醛类物质转化为相应的羧基酸，是 生物体内清除活性氧物质的重要酶类，对于维持生物机体的物质平衡有着重要作用。以冬枣 半红期果实分离的总 RNA 为模板，经 RT-PCR 扩增得到 1095bp 的 ALDH 全长序列，与 GenBank 登录号为 JN831451.1 的冬枣乙醛脱氢酶基因完全一致。此质粒经 Xba和 Xma 限制性内切酶双酶切消化后，插入植物表达载体 pBI121 的 35S 启动子和 NOS 终止子之间， 成功构建 pBI121-ALDH 正义表达载体。 关键词：冬枣；乙醛脱氢酶；植物表达载体 中图分类号：Q812 Cloning and plant expression vector construction of aldehyde dehydrogenase gene in Ziziphus jujuba Lin Xinggu, Pang Xiaoming (National Engineering Laboratory for Tree Breeding, Centre for Computational Biology, Key Laboratory of Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China) Abstract: Aldehyde dehydrogenase (ALDH) can convert aldehydes into the corresponding carboxylic acid, scavenging the reactive oxygen species in vivo, which is important for maintaining the material balance of living organisms. Using the total RNA of half-red jujube fruit as template, the full-length sequence of ALDH was isolated by RT-PCR amplification, which is exactly the same as the aldehyde dehydrogenas gene of GenBank accession number JN831451.1. After digested by XbaⅠand XmaⅠrestriction enzyme, this plasmid was inserted between 35S promoter and NOS terminator of the expression vector pBI121 successfully. Key words: Ziziphus jujuba; Aldehyde dehydrogenase; plant expression vector 0 引言 醛脱氢酶( Aldehyde dehydrogenase, ALDH )可以将维生素、氨基酸、碳水化合物和膜 脂等代谢途径产生的中间产物——醛类物质（乙醛、丙二醛、甘油醛、甜菜碱醛等）转化为 相应的羧基酸，是生物体内清除活性氧物质的重要酶类，对于维持生物机体的物质平衡有着 重要作用[1, 2]。在各种生物中已发现了超过555个编码不同醛脱氢酶的基因[3]，并根据酶活性、 亚细胞定位等不同特征, 可以把醛脱氢酶家族划分为20多个不同成员的亚家族[3, 4]。目前植 物中的醛脱氢酶被分为12个亚家族: ALDH2、 ALDH3、 ALDH5、 ALDH6、 ALDH7、 ALDH10、 ALDH11、 ALDH12、 ALDH18和 ALDH21, 其中ALDH11、 ALDH19和 基金项目：国家自然科学基金青年基金；教育部博士点新教师基金（“冬枣果实软化相关的 差异表达基因发掘”） 作者简介：林星谷（1988-），女，硕士研究生，经济林遗传育种 通信联系人：庞晓明（1973-），男，副教授，枣采后软化分子生物学. E-mail: xm