中华补血草潮霉素敏感浓度的确定.docVIP

  中华补血草潮霉素敏感浓度的确定# 张小通，李燕，曹子谊** （山东师范大学生命科学学院） 5 10 摘要：[目的]：以野生型中华补血草为材料，确定其对抗生素潮霉素的敏感浓度,为以后以潮 霉素为基础的基因工程载体构建以及转基因植株筛选提供了基础。[方法]：以补血草叶片为 材料，消毒后经叶盘法切片后，培养于添加不同浓度潮霉素的 BI 培养基中 30 天以研究其对 不定芽的影响。[结果]：敏感浓度为 20mg/L。 关键词：中华补血草；组织培养；潮霉素 中图分类号：请 S567.23+9 文献标志码： A  The Determination of Sensitivity of Limonium sinense to the Antibiotics Hygromycin 15 20 Zhang Xiaotong, Li Yan, Cao Ziyi (School of Life Sciences, Shandong Normal University) Abstract: We optimized the tissue culture protocol and rapid propagation system of Limonium sinense to determine the sensitivity of hygromycin, which provided basis for further gene research and screening of transgenic plants. Leaves of Limonium sinense were cut into pieces as explants and cultivated on MS medium supplemented with 0.5 mol/L 6BA and 0.1 mol/L of IBA to induce adventitious buds, and different concentration of hygromycin added to the medium to detect the toxicity to the callus and bud differentiation．The results showed that the effective concentration of antibiotics hygromycin to inhibit the adventitious buds differentiation is 20 mg/L． Key words: Limonium sinense；Tissue culture；hygromycin 25 0 引言 中华补血草[ Limonium sinense(Girard) Kuntz]是蓝雪科植物泌盐盐生植物。中华补血草 具有良好的药学价值，同时又是非常好的观赏、装饰材料，其干花保存时间长，不易损坏； 常见于盐碱地和滨海滩涂等盐渍化程度较高的土壤环境中。可以将体内的盐分通过盐腺分泌 30 35 出来，从而可以适应盐胁迫的环境；是一种十分有研究价值的植物，对它的遗传转化体系的 研究对植物耐盐的基础研究有很重要的作用。 泌盐是研究植物抗盐研究中非常有意义的方向，也是未来作物耐盐遗传育种的最终途 径。人们对盐腺的形态构造及其泌盐过程和规律已有初步了解[ 1]，但泌盐的分子机理至今仍 未研究透彻。中华补血草的遗传转化研究为泌盐机制研究奠定了基础，卡那霉素为选择标记 的中华补血草遗传转化体系已经初步建立[2],但假阳性率较高，为后期鉴定增加了很大的工作 量。植物对潮霉素的敏感性比卡那霉素更高，潮霉素筛选假阳性率低，重复性好。以潮霉素 进行筛选能起到更好的结果。本文以潮霉素作为筛选因素进行研究中华补血草对它的敏感 性。 基金项目：山东省自然科学基金(Y2007D19),教育部博士点基金(20070445002) 作者简介：张小通(1986-)，男，硕士研究生，研究植物耐盐分子生物学 通信联系人：曹子谊(1965-)，男，教授，主要研究方向中：植物耐盐机理. E-mail: thellungiella@sdnu.edu.cn -1- 1 材料与方法   40  1.1 实验材料 潮霉素（母液的浓度为50mg/mL）、BI培养基 （MS+0.5mol/L 6BA+0.1mol /L IBA ,PH为 5.6）、多年生中华补血草（本实验室种植）组织培养条件为20～25℃, 每日光照12h, 光强 2000～3000 lx。 1.2 方法  45  1.2.1  外植体材料灭菌 选取中华补血草成熟的地上部叶片为材料, 自来水流水冲洗 5 min, 用