东亚飞蝗几丁质酶家族基因的表达特性与功能研究.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(3):485-492 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.03.007 东亚飞蝗几丁质酶家族基因的表达特性与功能研究 1 2 1 2 1 2 1 1 2 李大琪 ，杜建中 ，张建琴 ，郝耀山 ，刘晓健 ，王亦学 ，马恩波 ，张建珍 ，孙 毅 1 2 （山西大学应用生物学研究所，太原 030006 ； 山西省农业科学院生物技术研究中心，太原，030031 ） 摘要：【目的】研究东亚飞蝗几丁质酶家族基因的时空表达特性及其在蜕皮发育中的生物学功能，筛选在飞 蝗发育过程中致死性的几丁质酶基因，为实现基于 RNAi 的飞蝗有效控制提供重要的基础数据。【方法】在东亚飞 蝗 EST 数据库搜索几丁质酶基因片段，用生物信息学方法分析所获得的基因片段序列；以飞蝗不同龄期第 4 天若 虫和 5 龄东亚飞蝗不同组织部位为材料提取 RNA 并反转录为 cDNA，应用 RT-PCR 方法研究时空表达特性；选取在 表皮高表达的几丁质酶基因 LmCht6，采用 RNA 干扰方法研究其生物学功能。【结果】基于东亚飞蝗 EST 库搜索和 进一步的序列分析，共获得7 条几丁质酶基因片段；不同组织部位与不同龄期RT-PCR结果表明这7条几丁质酶基 因的时空表达特性存在明显差异，其中 LmCht6 主要在表皮表达；LmCht6 的 RNA 干扰试验表明：2 龄飞蝗注射 dsLmCht6 后，其几丁质酶基因 LmCht6 表达量明显降低；飞蝗从2龄到3龄的龄期转化过程中，表现为发育延迟，新 表皮与旧表皮无法完全分离，导致死亡率达到72.2%。【结论】东亚飞蝗拥有多个几丁质酶基因，它们的时空表达特 性存在差异； LmCht6 在飞蝗蜕皮过程中具有十分重要的生物学功能，该基因被沉默后飞蝗无法完成蜕皮而导致死亡。 关键词：东亚飞蝗；几丁质酶基因；RT-PCR；RNA干扰 Study on Expression Characteristics and Functions of Chitinase Family Genes from Locusta migratoria manilensis (Meyen) 1 2 1 2 1 2 1 LI Da-qi , DU Jian-zhong , ZHANG Jian-qin , HAO Yao-shan , LIU Xiao-jian , WANG Yi-xue , MA En-bo , 1 2 ZHANG Jian-zhen , SUN Yi 1 2 ( Research Institute of Applied Biology, Shanxi University, Taiyuan 030006; Biotechnology Research Center, Shanxi Academy of Agricultural Sciences, Tai