丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法的建立.docVIP

??３８１４  中华临床医师杂志（ 电子版）２０１３ 年?５ 月第?７ 卷第?９ 期　Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ?（ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ?）?，Ｍａｙ?１，２０１３?，Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．９  临床论著 丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨 荧光免疫分析法的建立 谭玉华　孙勇　吴道贫　陈建起 　　【 摘要】?　目的　建立丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法。 方法　采用丙型 肝炎病毒基因重组多表位嵌合蛋白作为包被抗原，生物素标记抗原作为桥接抗原，链霉亲和素标记铕作为示 萘 ０９００４７ 为溯源，应用桥式双抗原夹心法建立丙型肝炎病毒抗体时间分辨荧光免疫分析法。 结果　自建方法 在０畅０３１?～４畅００ ＮＣＵ?／ｌ 内， 相 关 系 数 可 达?０畅９９?； 分 析 内 和 分 析 间 变 异 系 数 均 小 于?１０％； 灵 敏 度 可 达 ０畅０１６ ＮＣＵ?／ ｌ；校准品的效价比在?０畅９０?～１畅１０?，平均回收率为?１０１畅４７?％；与相关疾病的抗原或抗体无明显交 叉反应，其表观浓度值均小于?０畅０３ ＮＣＵ?／ｌ；参考值为?０畅０５ ＮＣＵ?／ｌ；符合国家检定标准的要求；３７?℃恒温箱 烘烤?７ ｄ 后检测性能无明显改变；与同类方法学比对符合性好。 结论　自建方法精密度好，灵敏度高，特异 性强，准确性好，线性范围宽，符合率高，能满足临床检测需要。 【关键词】?　肝炎病毒属；　双抗原夹心法；　生物素亲和素法；　时间分辨荧光免疫法 Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｔｉｍｅ唱ｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ　ＴＡＮ Ｙｕ唱ｕａ， ＳＵＮ Ｙｏｎｇ，ＷＵ Ｄａｏ唱ｉｎ，ＣＨＥＮ Ｊｉａｎ唱 Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｆｅｎｇｈｕａ Ｂｉｏ唱ｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏ，ＬＴＤ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０７３０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＴＡＮ Ｙｕ唱ｕａ，Ｅｍａｉｌ：ｔａｎｙｗｈｙ＠ｙａｈｏｏ ｃｏｍ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】?　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ?　 Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｔｉｍｅ?唱ｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ?（ ＴＲＦＩＡ?） ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ?（ａｎｔｉ唱ＣＶ）?．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ ｓａｎｄｗｉｃｈ ＴＲＦＩＡ ｏｆ ａｎｔｉ?唱ＣＶ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ?，ＨＣＶ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｍｕｌｔｉ?唱 ｅｐｉｔｏｐｅ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗａｓ ｃｏａｔｅｄ ｏｎ ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ?，ｔｈｅ ｂｒｉｄｇｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｌａｂｅｌｅｄ ｂｙ ｂｉｏｔｉｎ?，ｔｈｅ ａｖｉｄｉｎ ｗａｓ ｌａｂｅｌｅｄ ｂｙ Ｅｕｒｏｐｉｕｍ?．Ｔｈｅ ｍａｉｎｌｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ?２唱ａｐｈｔｈａｌｅｎｅ ｔｈｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｏｎｅ?．Ｔｈｅ ｔｒａｃｅａｂｉｌｉｔｙ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｌｆ?唱ａｄｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ ｗａｓ ｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ＧＢＷ?（ Ｅ）?０９００４７?．Ｒｅｓｕｌｔｓ?　Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｓｅｌｆ?唱ａｄｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｆｒｏｍ?０畅０３１ ＮＣＵ?／ｌ ｔｏ?４畅０ ＮＣＵ?／ｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｏｓｅ唱ｅｓｐｏｎｓｅ ｃｕｒｖｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｒｅａｃｈｅｄ?０畅９９００ Ｔｈｅ ｉｎｔｒａ唱ｓｓａｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｒ?唱ｓｓａｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ?（ ＣＶ） ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ?１０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ?０畅０１６ ＮＣＵ?／ ｌ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ ｍｅａｓｕｒｅｄ １ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｏｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ?．Ｔｈｅ ｒｅｆｅｎｃｅ ｖａｌｕｅ ｗａｓ?０畅０５ ＮＣＵ?／ ｌ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ ｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄｓ?．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉ