用同步荧光光谱法研究铽()与脱铁运铁蛋白的.pdfVIP

第46 卷 第5 期 2001 年3 月 简 报 用同步荧光光谱法研究铽( )与脱铁运铁蛋白的作用 杜秀莲 李荣昌 王 夔* (北京大学药学院化学生物系, 北京 100083. * 联系人, E-mail: wangkui@) 摘要 用同步荧光光谱法区分脱铁运铁蛋白的酪氨酸和色氨酸残基的荧光, 研究了铽( )在脱铁运铁蛋 白上的结合以及由此引起的构象变化与铽( )浓度的关系. 从所得铽( )对脱铁运铁蛋白酪氨酸和色氨 酸残基荧光猝灭的相对程度可知, 铽( ) 的强结合部位包含酪氨酸残基, 但由此引起的构象变化则以色 氨酸残基转向亲水环境为特征. 关键词 同步荧光光谱法 铽( ) 人脱铁运铁蛋白 [1] 运铁蛋白是负责铁跨细胞膜转运的蛋白 . 但是 ( ) 材料. 色氨酸, 酪氨酸(上海生物制品公司, 有些 3 价 亲氧的软酸金属离子, 如铝( )(Al3+) 镓 电泳纯), 人脱铁运铁蛋白, Hepes, Tb O (Sigma), 其 4 7 ( )(Ga3+)等, 尽管是非必需金属, 由于与铁( )(Fe3+) 的 他试剂为分析纯. [2,3] 相似性, 也可能被运铁蛋白携带进入细胞 . 因为稀 ( ) 方法. (1) TbCl 溶液的配制. 将Tb O 溶 3 4 7 土阳离子和这些离子在以上方面也十分相似, 所以也 于浓盐酸, 加热赶去过量酸后用去离子水定容, 用氢 能和运铁蛋白结合, 有可能也被运铁蛋白携带进入细 氧化钠调其p H 在4~5. 以二甲酚橙作指示剂, 用 胞. 但是, 能与不能主要是取决于稀土-脱铁运铁蛋白 EDTA 标定其浓度. (2) 色氨酸 酪氨酸溶液的配制. 配合物的构象与铁运铁蛋白是否相近, 特别是与运铁 将固体溶于含0.1 mol/L N aCl, pH = 7.4 的0 .1 mol/L 蛋白受体对接部分的构象是否相近. 已知运铁蛋白和 Hepes 缓冲溶液, 使其终浓度为 10 mol/L. 等体积混 其他蛋白一样有酪氨酸(Tyr) 和色氨酸(Try) 残基来源 合得二者混合物, 终浓度均为5 mol/L . (3) 脱铁运 4 1 的自身荧光. 因此, 用荧光光谱法可以研究其结合部 铁蛋白的处理, 如文献[19]. 以e = 9.3 × 10 cm L 位和结合引起的构象改变. 由于每一分子中有 18 个 mol 1 确定蛋白质的浓度. 所用缓冲溶液同(2) . (4) 同 [4] 步荧光光谱测定. 在 RF540( 日本岛津) 荧光光谱仪上 色氨酸残基随机分布 , 每一金属结合部位有两个酪 [5]