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生物秀 -专心做生物！ 警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、 以及相关安全部门的监督。作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的 危险。麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。法律声明 采用优化红球菌的地高辛标记探针的DNA印迹方案 xian o’brien 大公无私地为此测试，优化和作图 黑体字表示的试剂列在方案末，以斜体字标明 Roche DIG 标记和测试工具箱 采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记 DNA 探针 将 10 ng~3 μg 的DNA 探针（基因组、质粒或基因片段）用蒸馏水稀释至 16 μl 煮沸 10 分钟使 DNA 变性，迅速放在冰上冷却，以防其重退火。 加入 4 μl 地高辛高效标记混合物，振荡混匀 m 37°C 下过夜培养 加入 2μl 0.2M EDTA (pH 8) 使反应停止，并于 65°C 下 10min 加热降低其活性。 o c 使用前煮沸探针 10-20min 使用过的探针可以储存在-20°C 的杂交缓冲液中，并能重复使用。 e. 将 DNA 从凝胶转移到膜上 o 将凝胶在合适的电压下进行电泳得到单一的带型；染色并照相以参考大小。 小片段转移较有效。对于大的 DNA 片段，可增用短波透射仪进行 2 分钟的紫外切割步骤 i 将凝胶转移至可密封的 Tupperware 塑料容器中 传统的转移方法 b e 室温下在 0.25 的盐酸中培养 40 分钟（要盖住凝胶），使之脱去嘌呤 将 2X 置于 MilliQ 溶液中漂清 . 物 将 2X 置于变性溶液中培养 20min 以附着在脱嘌呤位点 w 在中性溶液中培养 30min 生 如图所示，采用 20X SSC 作为转化溶液，进行毛细管转化 易 w 转化过夜（48 小时脉冲场凝胶电泳） w 另供选择的快速转化方法（Phil 的最爱） 室温下于 0.25 M HCl 中培养直至染色带变成黄色（20 分钟） 将 2X 置于 MilliQ 溶液中漂清 如图所示，采用 0.4N 的 NaOH 溶液作为转化溶液，进行毛细管转化 转化过夜（48 小时脉冲场凝胶电泳） 易生物 -领先的生物医药商务平台 生物秀 -专心做生物！ 将 DNA 固定在膜上 切下凝胶和膜的左上角进行定向杂交 重染色并照相以评定转化率 在 2X SSC 溶液中迅速冲洗膜并转移至可密封的 Tupperware 塑料容器中 另可选：采用脱膜杂交方案进行膜的预分离，往往可以产生更纯的杂交 探针膜 预杂交膜置于震荡器上浸泡在 68°C 的