猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果检测.pdfVIP

猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果检测 摘要 (Rotaviras)成员，作为婴幼儿和动物腹泻的主要病原在世界范围内广泛流行，特 别是在发展中国家每年造成巨大损失。鉴于其危害严重且无有效治疗手段，世界 卫生组织将RV疫苗列为最优先发展的疫苗项目之一，尤其是它的基因工程疫苗的 研制更为重要。随着分子生物学的深入研究，现已证明VP4蛋白是RV的外衣壳 蛋白，介导病毒的吸附和穿入，使病毒具有致病性；VP4还是一种中和抗原，其中 和抗原位于保守的VP4抗原表位区，自然感染时能刺激机体产生中和抗体。 本实验选择乳酸菌作为受体菌株表达外源基因Vp4，即可将乳酸菌的益生功 能和外源基因的特异性免疫相结合，从而研制猪轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌。 目的在于为开发研制预防猪轮状病毒病的基因工程乳酸菌口服疫苗奠定基础。 和以胸苷酸合成酶基因(Thymidylate 为选择压力的双标记的可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的质粒载体 pW425et，构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒 pW425et．Vp4。经筛选表达的阳性重组质粒应用电穿孔转化实验转化入嗜酸乳杆菌 受体菌株中，筛选表达的阳性重组乳酸菌大量培养，离心加入灭菌脱脂乳液给 细胞亚群的