分子遗传学技术在诊断病理学中的应用.pdfVIP

2003 12 10 6 329 1 2 1 2 王鲁平 张建中 ( 100700 306 ) 近年来, 迅速发展的分子遗传学技术愈来愈多地进入常规病理诊 美国Georgetown 大学医院病理科常 规分子诊 实验室在分子遗传学技术对诊 病理学中的应用较具特色, 现结合近期参考文献简介如下 R3943 A 1007- 8096(2003) 06- 0329- 03 尽管形态学依然是诊 病理学的基础, 但分子 结果显示不肯定结果, 不能解释的结果及肿瘤成分 遗传学技术现已广泛应用于临床病理实验室, 分子 可能不全等情况时, 可应用PCR 或R -PCR 进 一步 遗传学的结果已愈来愈多地参与外科病理诊 和报 检测 告本文就美国Georgetown 大学医院( 一所600 余 12 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 张病床的综合性医院) 病理科常规分子诊 实验室 PCR 技术是 1985 年由Kerry Mullis 介绍引入 的情况结合文献简介如下 应用这一技术, 一个DNA 片段可从单 一拷贝复制百 1 万倍, 可有效地用于疾病基因分析 分子遗传学技术主要用于分析病变组织和细胞 PCR 是一个简单的化学反应, 可使核酸序列无 核酸的变化, 包括: 分子杂交:斑点杂交Southern 限制地扩增, 其中包括三 个主要步骤: 变性, 退火和 Northern 杂交和原位杂交; 靶位点基因扩增技术: 延伸每一个循环的结束, PCR 产物都成为双倍 PCRR -PCR 和实时PCR; 探针扩增技术: Invader DNA 靶序列的扩增需要下列混合成分完成: 靶DNA 分析; 信号扩增方法: branched DNA( bDNA) 分析; 模板寡核苷酸引物镁离子dN Ps 和DNA 多聚酶 基因芯片技术病理科常规工作应用最多的方法 等正常情况下, DNA 聚合酶起催化反应, 要合成 是FISHPCR 和R -PCR 新的DNA 片段, 需要有小的短链DNA 去 引发这 11 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, 一反应因此在DNA 合成的起始点设计两 个引物: FISH) 原位杂交是一项可将分子遗传学变化与形 一个用于互补模板DNA 序列上游; 另 一个用于互补 态学相结合的基因检测手段, 为病理医师提供可见 DNA 序列下游PCR 寡核苷酸引物 一般为 17~ 30 的诊 依据FISH 应用DNA 双链碱基互补结合和 个碱基或稍长(单链) 许多引物已商品化或可在生 Southern 分析原理, 并标以荧光作为检测系统DNA 物公司合成, 经过25~ 30 次循环扩增产生扩增产 探针( 通常为 10~ 20kb 的寡核苷酸序列) 可直接与 物的检测, 一般是对双链DNA 进行染色后通过凝胶 预测分子连接, 使杂交信号在荧光显微镜下可见 电泳分离各自条带凝胶的化学成分和类型电泳 应用变性和退火的方法, 使靶基因DNA 和DNA 探 的温度和缓冲液的类型影响着DNA 的迁移率, 通常 针变性假如互补的序列存在于靶 DNA, 荧光探针 使用半固体物质( 琼脂糖或丙烯酰胺) 在电场中分离 将与其结合并退火到靶DNA; 假如在靶DNA 上没有 DNA 扩增产物, 从阴极向阳极迁移PCR 产物通过 互补序列, 探针不与其结合, 则无荧光显示DNA 凝胶与DNA 梯度标准一起进行电泳, 紫外灯下观察 FISH 探针现已广泛应用并有许多商品化产品, 胎儿 DNA 条带PCR 的优势, 在于应用 一个简单的工具 期染色体三体微缺失淋巴造血疾病和 一些实体瘤 去获得我们希望得到的特异性基因或DNA 区段, 而 的探针已成为许多病理诊 不