高原鼠兔ISSR引物反应体系的优化与筛选.pdfVIP

( ) 安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri . Sci . 2008 ,36 33 :14422 - 14424 ,14430 　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑 　姜丽 　责任校对 　傅真治 高原鼠兔 ISSR 引物反应体系的优化与筛选 葛艳丽1 ,2 , 慈海鑫1 ,2 , 唐利洲1 ,2 , 林恭华1 ,2 , 苏建平1 ( ) 　 1. 中国科学院高原生物适应与进化重点实验室 , 中国科学院西北高原生物研究所 ,青海西宁 810001 ;2 . 中国科学院研究生院 ,北京 100039 ( ) 摘要　[ 目的]筛选和优化高原鼠兔 Ochotona curzoniae 适宜的ISSR 反应体系 , 以在对高原鼠兔进行 ISSR 分析时获得清晰和多态性好的 扩增结果。[ 方法] 以高原鼠兔基因组DNA 为模板 ,通过单因素试验 ,对体系中的模板浓度、Mg 2 + 浓度、dNTPs 浓度、Taq 酶用量、引物用 μ μ 量、退火温度进行探讨 。[ 结果] 结果表明,高原鼠兔 ISSRPCR 扩增的最佳条件为 :25 l PCR 反应体系 ,其中4 l DNA 模板 ,1. 5 mmol/ L μ ( ) MgCl2 ,0 . 2 mmol/ L dNTPs ,1. 25 U Taq 聚合酶 ,1. 5 mol/ L 引物 ,复性温度4560 ℃退火温度随引物不同而确定 。用 11 条引物进行了PCR 扩增 ,筛选出效果较好的6 条引物 。[ 结论] 该反应体系的建立为鼠兔遗传多样性和分子系统学研究提供技术支持 。 关键词　高原鼠兔;ISSR ;优化 PCR ( ) 中图分类号　S813 . 3 　　文献标识码　A 　　文章编号　0517 - 6611 2008 33 - 14422 - 03 Optimization and Screening of ISSR Primer Reaction System for Ochotona curzoniae ( Key Laboratory of Adaptation and Evolution of Plateau Biota ,Northwest Institute of Plateau Biology ,Chinese Academy of Sciences ,Xin GE Yanli et al 　 ing ,Qinghai 810001) Abstract 　[Obj ective ] The research aimed to study the suitable ISSR reaction system for Ochotona curzoniae ,to obtain high resolution and multiple poly 2 + morphic bands. [Method ] Based on the genomic D