培养神经元网络多电极阵列记录及其信号分析.pdfVIP

  培养神经元网络多电极阵列记录及其信号分析 从大脑整体到脑区再到细胞和分子水平，神经活动在不同层次上具有既随机 又有序的特性。人们开发并使用了多种工具和方法对其进行研究，从宏观整体层 面的功能核磁共振成像、脑电、事件相关电等技术，到微观细胞层面，膜片钳技 术以及借助显微光学切片断层成像系统(MOST)等细胞切片成像方法。针对整体 论和还原论之间、宏观水平和微观水平之间的沟壑，应当寻找或建立介观层次的 研究对象，从而将宏观水平神经活动的生理意义和功能表征与微观水平电化学过 程的信号本质和过程修饰之间建立关联。 离散培养网络被视为具有神经元网络共性特征的重要研究模型，基于多电极 1 阵列系统的培养神经元网络可开展常规的药理学研究、刺激响应编码研究 ，也 被用于在体外建立学习和记忆等高级功能的介观层次网络模型 2-4 ，甚至还被应 用于机器人和航天器反馈控制的前沿性研究工作中。武汉光电国家实验室建立了 5 神经元网络的体外长时间培养和多通道海量信号采集处理方法 ，利用培养的神 经元网络模型，通过标准化记录和数据筛选，建立了神经元网络发育数据库，进 2 6 行了一系列的可塑性实验 和神经元网络发育研究 。发现真实神经元网络自组 织临界特性能够引导网络自发地进入一种连续转换的瞬态调控模式，有可能用于 预测神经系统的发育趋势，为揭示神经发育中“生老病死”的内在机制提供了新 7 的视角 。  1、海马神经元网络的体外培养 本部分概述海马神经元网络体外长时间培养方法，包括取材选择、培养器皿预处理、所 需实验条件、长时间培养注意事项、常见问题及解决方法，分为实验演示、理论讲课，分别 2 学时。 体外细胞培养就是将组织从动物体内取出，利用蛋白酶消化和机械打散成单 细胞悬浮液，接种到培养介质上，在适当的渗透压、温度、酸碱度及一定的营养 条件下，维持细胞的正常生长和繁殖。神经元具有与其他细胞不同的特性，且正 常情况下成熟神经元不再分裂增殖，因此较难体外培养。武汉光电国家实验室生 物医学光子学功能实验室结合自己的实验目的摸索掌握了一套长时间体外培养 （长达18 个月）技术，并在此基础开展神经网络自发发育规律和可塑性机制研 究。 操作步骤主要分为：海马组织分离；酶解；接种；日常换液。 1     2、培养网络电活动多位点同步记录 概述多电极阵列系统的应用及原理，MEA 系统介绍，多位点同步记录规范与注意事项， 常见问题及解决方法，实地实验演示；理论讲课 1 课时，实验 1 课时。 神经元膜电位的变化是由于细胞膜内外的离子分布引起的，处于静息状态的 神经元具有相对稳定的离子跨膜运输或离子流。当神经元受到刺激（电信号或化 学信号）时，产生去极化。当刺激足够强，会诱发动作电位。神经元膜电位的变 化可以用玻璃微电极进行记录，根据电极记录位置的不同，可以分为胞外记录和 胞内记录。胞外记录则是将电极放在细胞膜附近，利用膜电位变化过程中离子的 流动来进行检测。多电极阵列系统（Multi-Electrode Array ，MEA ）是一种多位 点的胞外记录工具。当神经元贴紧电极生长时，细胞膜和电容相当于电容的两个 极板，细胞膜外电位的变化被电极内部的导体所感应，从而可以对细胞外膜电位 的变化进行监测。 图 1 实验系统示意图 图中左侧为实验系统连接和实验示范流程图，右侧显示主要的硬件设备实物图。 多通道电生理记录系统主要包括多电极阵列培养皿、放大器、刺激器、温度 控制仪、数据采集卡、数据记录系统等。其中，多电极阵列培养皿中央包含一个 细胞培养皿为细胞培养区域。培养区底部有 64 个微电极，周围的引脚用于采集 各个电极记录到的网络活动信息。放大器主要负责输出刺激信号和采集各个电极 的活动信息，并进行前置放大；