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高滴度慢病毒的制备和纯化 高滴度慢病毒的制备和纯化 Production, Purification of Lentivirus for High-titer 吴渊 潘建青 罗振 王立平 摘 要 基于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒载体是一种广泛用于体外和动物实验的转基因载体。慢病毒载体可以感 染分化和非分化细胞，被感染的细胞长期稳定的表达转基因产物。最近，慢病毒载体已经被广泛地应用于中枢神经系统的 转基因研究。本文将介绍一种新的慢病毒制备方法。本方法制备和纯化的慢病毒可直接用于在活体中标记细胞特异性的神 经元。 关键词 慢病毒；光感基因调控技术 ABSTRACT　Lentivirus vector based on the human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) is primarily a research tool to introduce a gene product into in vitro systems or animal models. The advantage of lentivirus vector is the ability for gene transfer and integration into dividing and non-dividing cells. Recently, the lentivirus system is used to transduce heterologous gene efficiently into central neural system. In this paper, we propose a novel protocol for lentivirus production. The highly purified and concentrated viruses can be used in cell-specific and in vivo neural labeling. KEYWORDS Lentivirus; Optogenetics 1 引言 慢病毒(lentivirus)为一类逆转录病毒的总称, 是 斯坦福大学生物工程学系Deisseroth 实验室，利用 基于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)改建而来的载体系 慢病毒载体将ChR2导入体外培养的神经元细胞，第 统，以其高效而稳定的特点被作为基因治疗动物实 一次在细胞水平上用光快速、精确控制神经元的兴 验的常用选择。相比传统的逆转录病毒载体,新一代 奋性，并证实在活体脑片上可用光刺激ChR2来研究 的慢病毒载体主要有以下几个优点: a)慢病毒载体既 神经细胞之间的相互联系。Abbott等将ChR2导入 可以转染分裂中细胞，包括造血干细胞,神经干细胞 大鼠延髓腹外侧核，然后用蓝光刺激该核团，则交 等,又可以感染分化终末的细胞，包括神经元,肝实质 感神经活性增加，血压升高。这些研究通过慢病毒 细胞等；b)由慢病毒载体携带整合入宿主基因组的 载体将光感基因导入实验动物的大脑，持久稳定的 目的基因对转录沉默作用有较强的抵抗能力,在体外 表达ChR2或NphR蛋白，在蓝/黄光的刺激下，兴奋 培养细胞实验和动物实验中,由慢病毒载体携带导入 或抑制特定的神经元。通过这种光调控方式，我们 的目的基因可以在宿主细胞中得到长期而稳定的表 能够解析神经精神系统疾病病理状态下神经回路的 达；c)慢病毒载体可以兼容多个转录启动子,包括细 特征，进而为修复病理条件下的神经回路提供理论 胞特异性启动子和在基因组中普遍存在的管家基因 依据。 的启动子；d)经过改建后的慢病毒载体可以容纳约 10kb左右的外源基因,因此绝大多数的cDNA都能被 克隆入慢病毒载体。慢病毒载体的上述优点使其成 为体内和体外基因转移的