水稻花粉总蛋白质双向凝胶电泳方法建立及应用-中国水稻科.pdfVIP

维普资讯 中国水稻科学(ChineseJRiceSci)，2007，21(1)：13～19 t http；／／www．ricesci．an；http；／／www．ricescience．org 水稻花粉总蛋 白质双 向凝胶电泳方法建立及应用 文 李 ， 刘 盖 李绍清 李国民1 陶 钧1 朱英国， (长沙理工大学 生物与食品工程学院。湖南 长沙410076I。武汉大学 教育部发育生物学重点实验室．湖北 武汉430072； 通讯联系人： zhuyg@public．wh．hb．cn) EstablishmentandApplicationofTwo—DimensionalGelE1ectrophoresisAnalysisofProteins from RicePollen WENLi!’，LIUGai。，LIShao—qing。，LIGuo—min ，TAOJun ，ZHUYing-guo。， (CollegeofBiologicalandFoodEngineering，ChangshaUniversityofScienceandTechnology，Changsha410076，ChinaI。KeyLaborato— ryofMinistryofEducationinDevelopmentalBiology，WuhanUniversity，Wuhan430072，China； Correspondingauthor，E-mail：zhuyg @public．wh．hb．cn) Abstract：Tobetterunderstandthemolecularmechanism ofcytoplasmicmalesterility(CMS)attheproteinlevelduring thedevelopmentofmicrospores，proteomictechniquewasusedtO investigatetheproteinexpression profileinuninucleate- stagepollenofthericeCMSlines．Totalpollenproteinswereextractedusingtwodifferentmethodsandthenseparatedby two-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)．Anefficientandeconomicmethodforhighqualityproteinpreparationfrom rice pollenfor2-DEwasestablished．Thesilver-stainedproteinspotswereanalyzedbyusingsoftwarePDQuest2DE．therewere 1500detectablespotsOnthege1．Theseresultsshowedthat，theproteinsextractedbythismethodwereingoodintegrityand purity，andcouldmeettheneedsofproteomicanalysis．Comparingwiththe2一DEmapsofthetotalproteinsfromthebinucle— ate-stageanduninuc1eate_stagepollen，thenumberoftotalproteinsandthevolumeofsomeproteinsweredecreasedinthebi— nucleate-stagepollen． Keywords：pollen；rice；two-dimensionalgelelectrophoresis；cytoplasmicmalesterilitylproteomics!methodology 摘 要：采用石英砂加液氮研磨方法破碎花粉 ，然后用两种不同的方法提取水稻花粉总蛋白质 ，之后采用固相 pH梯度 等电聚焦／SDS双向凝胶电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻单核期花粉总蛋 白质进行 了分离。通过银染显色， PDQuest2DE软件可识别约1000 1500个蛋白质点。其中TCA一丙酮