人酪酪肽及其衍生物的克隆、表达及活性测定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（２）：７１１ ? 人酪酪肽及其衍生物的克隆、表达及活性测定 王小溪　李　娟　劳　勋　张洪丹　黄　静　吴自荣 （华东师范大学生命科学学院　上海　２０００６２） 摘要　酪酪肽（ｐｅｐｔｉｄｅｔｙｒｏｓｉｎｅｔｙｒｏｓｉｎｅ，ＰＹＹ）是存在于机体肠道的肽类激素，有ＰＹＹ 和ＰＹＹ １３６ ３３６ 两种形式，后者可以降低个体食欲并减少食物摄入。分别通过人工合成基因和ＰＣＲ定点突变的 ３７ 方法，得到ＰＹＹ 衍生物ＰＹＹ Ｇｌｙ及ＰＹＹ 的基因，然后克隆到ｐＥＴ３２ａ（＋）表达载体中，转 ３３６ ３３６ ３３６ 化大肠杆菌并进行诱导表达。通过亲和层析得到融合蛋白，经肠激酶酶切和二次亲和层析得到 目的多肽。在昆明鼠体内检测二者生物活性，结果显示剂量为８００ｇ／ｋｇ时ＰＹＹ 及 ＰＹＹ  μ ３３６ ３３６ ３７ ３７ Ｇｌｙ均可抑制昆明鼠的摄食，且抑制作用可达９ｈ，而ＰＹＹ Ｇｌｙ组的平均抑制率可达５０％，明显 ３３６ 高于ＰＹＹ 。 ３３６ 关键词　酪酪肽　原核表达　生物活性 中图分类号　Ｑ８１９ 　　酪酪肽又称肽ＹＹ（ｐｅｐｔｉｄｅｔｙｒｏｓｉｎｅｔｙｒｏｓｉｎｅ，ＰＹＹ）， 采用基因工程手段获得 ＰＹＹ ；但基因工程无法实现 ３３６ 主要是由结肠、回肠的Ｌ细胞分泌的３６个氨基酸组成 ［１１］ 多肽羧基末端的酰胺化。依据Ｋｅｉｒｅ等 报道，羧基末 的肠胃道肽类激素。酪酪肽是根据其肽链两端的氨基 ３７ 端酰胺化的ＰＹＹ由ＰＹＹＧｌｙ经体内酰胺化酶的作用 酸残基均为酪氨酸得名。ＰＹＹ最初是由Ｔａｔｅｍｏｔｏ等［１］ 形成。对此，本实验克隆、表达了ＰＹＹ 的衍生物——— ３３６ 从猪小肠粘膜中分离而得，是一种具有酰胺化羧基末 ３７ ＰＹＹ Ｇｌｙ，期望在体内酰胺化酶的作用下形成羧基 ３３６ 端的直链多肽。此后，又在人、大鼠、兔等生物的小肠