parkin基因外显子重排突变分析中的应用.pdfVIP

荧光半定量 PCR 在早发性帕金森综合征 parkin 基因外显子重排突变分析中的应用 郭纪锋 唐北沙 张玉虎 李静 中南大学湘雅医院神经内科 湖南 长沙，410001 Email:bstang7398@ 【摘要 】 目的 探讨 parkin 基因外显子重排突变在我国早发性帕金森综合征 (early-onset parkinsonism, EOP)中的突变情况。 方法 应用荧光半定量 PCR 方法对 22 个常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征（autosomal recessive early-onset parkinsonism ，AREP)家系及 61例散发性 EOP患者进行 parkin 基因外显子重排突变分析。 结果 发现有 11个 AREP家系和 4例散发 EOP患者有 parkin 基因外显子重排突变。在这 11 个 AREP家系中，2个家系为外显子 4的纯合缺失，各有 2个家系为外显子 1、外显子 2、外 显子 3 和外显子 4 的杂合缺失，此外，1 家系为外显子 3 和外显子 4 的复合杂合缺失。4 例 散发 EOP 患者中，1 例是外显子 4 的纯合缺失突变，另 3 例分别为外显子 2、外显子 3 和外 显子 4的杂合缺失。本组患者中，未见 parkin基因外显子重复突变。结论 我国 EOP患者存 在 parkin 基因外显子重排突变；parkin 基因外显子重排突变可能是我国 AREP 家系患者的 主要致病因素。 【关键词】 早发性帕金森综合征；荧光半定量PCR方法；外显子重排突变；基因 1. 引言 早发性帕金森综合征（early-onset parkinsonism,EOP）是一种早发性（一般发病年龄 ≤50岁）的帕金森病（Parkinson’s disease, PD），它有PD的一般临床特征，有些患者又 有其他临床特征，如症状晨轻暮重，休息后减轻，肌张力障碍，多巴胺治疗早期出现运动障 碍，腱反射亢进等。目前研究表明EOP与parkin基因突变有关，约50％常染色体隐性遗传早 发性帕金森综合征（autosomal recessive early-onset parkinsonism,AREP）和15%的散发 EOP患者有parkin基因突变[1，2]。在目前发现的parkin基因突变中，约半数为parkin基因外显 子重排（exon rearrangement,如外显子缺失、双重或多重重复改变等）[1，2，3]。外显子重排 可能以杂合形式存在，PCR扩增时这些有重排改变的外显子仍可扩增成正常大小片断的产物， 因此用DNA测序等非定量PCR方法并不能检测出。为了全面检测parkin基因突变，目前国外普 遍应用DNA测序结合定量PCR方法进行parkin基因的突变分析。为了解我国EOP患者parkin基 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（20020533024 ）资助 因外显子重排突变情况，我们首次在国内应用荧光半定量PCR（semiquantitative PCR）方 法对22个常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征（autosomal recessive early-onset parkinsonism ，AREP)家系及61例散发性EOP患者进行了parkin基因外显子重排突变分析。 2.对象和方法 2.1 对象 22个AREP家系及61例散发性EOP患者为我科及中国医学遗传学国家重点实验室 1997 年-2004 年所收集，来自湖南、湖北、江西、云南、浙江、山东、山西、广东、广西和 [4] 安徽等省市。诊断标准按国际公认的标准 。 2.2 DNA 制备 所有患者、家系成员及正常人都经知情同意，取外周静脉血 5-10ml，按常 规酚/氯仿法抽提基因组 DNA，-20℃保存。 [4] 2.3 荧光半定量PCR引物设计与合成 引物设计参考文献 ,正向引物