以变色酸为底物测定辣根过氧化物酶的研究.pdfVIP

第6 卷 分析化学 （T.FUV /WBUW. ）! 研究报告 第4 期 ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! $$% 年4 月 ’XCAYJY GZKA= [ BA=LRC\= ’XY*CJRKL 4@6 5 4@E 以变色酸! 为底物测定辣根过氧化物酶的研究 # 焦! 奎 ! 徐! 静! 孙! 伟! 江! 宏 （青岛科技大学化学与分子工程学院，青岛##$% ） 摘! 要! 变色酸（’( ）是一种具有电化学活性的物质，在碱性条件下，该物质在滴汞电极上) ##$ *+ （! , -’. ）左右产生还原波，加入/ 0 和辣根过氧化物酶（/1 ）后，该物质被氧化生成具有非电化学活性的 物质，导致溶液中游离的’( 浓度降低，相应还原波波高降低，/1 在一定含量范围内与伏安峰的降低值具 有良好的线性关系。通过测定波高的降低值可测定/1 ，测定游离/1 的线性范围是% , $ 2 3$ ) 4 5 % , $ 2 3$ ) 6 78 9 。对酶促反应的动力学进行了研究，反应的米氏常数#* : 3, 6; **=8 9 ，最大反应速率 $*? : 46, @ AB8 *CA 。 关键词! 变色酸 ，辣根过氧化物酶，酶联免疫分析，伏安法 #$ 引$ $ 言 ［3 5 6 ］ ［% ，4 ］ ［# ，E ］ 本课题组曾报道了一系列联苯胺及其衍生物 、苯二胺及其衍生物 和氨基酚类 物质为底 物的伏安酶联免疫分析法。辣根过氧化物酶［; ，@ ］ 对/ 0 氧化这些有机化合物的反应有很强的催化作 用。酶促反应的产物分别为偶氮联苯化合物、吩嗪类或亚胺类化合物、酮或含羰基的化合物。这些产物 均可在汞电极上还原产生良好的伏安峰，测定酶促反应产物的伏安峰便可测定/1 的活性，从而建立 起以/1 为标记酶的伏安酶联免疫分析法。这些体系的基本原理大都是在未加入/1 和/ 0 时，在 底物有机化合物的伏安曲线上没有伏安峰或只有很小的空白伏安峰，加入/1 和/ 0 后，产生良好的 /1 在一定含量范围内与伏安峰高具有良好的线性关系。本实验提出以’( 为底物的 伏安还原峰， 伏安酶联免疫分析新体系。本体系则是在未加入/1 和/ 0 时，’( 具有一良好的伏安还原峰，加 入/1 和/ 0 后，伏安还原峰减小，/1 在