第九至十一章、食品中副溶血性弧菌的检验.pptVIP

一、概况 副溶血性弧菌（V。parahemolyticus）于1950年从日本一次暴发性食物中毒中分离发现。该菌存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。根据菌体O抗原不同，现已有13个血清群。主要引起食物中毒，尤以日本、东南亚、美国及我国台北地区多见，也是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌。 本菌广泛存在于海水中，偶亦见淡水。在海水中能存活47日以上，淡水中生存1～2日。在37℃、pH7.7、含氯化钠3～4%的环境中生长最好。 本菌嗜盐畏酸，在无盐培养基上，不能生长，3%～6%食盐水繁殖迅速，每8～9分钟为1周期，低于0.5%或高于8%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋酸中或50%的食醋中1分钟即可死亡。不耐热，56℃、5分钟即可杀死，90℃、1分钟灭活。对低温及高浓度氯代钠抵抗力甚强。 目前已发现本菌有12种菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型。从患者粪便分离出菌株属于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，自致病食物分离的菌株90%以上属于Ⅳ、Ⅴ型。致病性菌株能溶解人及家兔红细胞，称为“神奈川”试验（kanagawa test）阳性。其致病力与其溶血能力平行，这是由一种不耐热的溶血素（分子量42000）所致。本菌能否产生肠毒素尚待证明。 媒介食品 副溶广泛存在于海岸和海水中，海生动植物常会受到污染而带菌。海鱼、虾、蟹、蛤等海产品带菌率极高；被海水污染的食物、某些地区的淡水产品如鲫鱼、鲤鱼等及被污染其他含盐量较高的食物如咸菜、咸肉、咸蛋亦可带菌，也可因受到污染而引起中毒。带用少量该菌的食物，在适宜的温度下，经3～4小时细菌可急剧增加至中毒数量。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。 临床表现 潜伏期多为10小时左右，一般8～40小时，主要症状有恶心、呕吐、上腹部阵发性剧烈腹痛、频繁腹泻、洗肉水样或带粘液便，无里急后重，每日5～6次，体温39℃。重症病人可有脱水、血压下降、意识不清等。病程2～4天，一般预后良好，无后遗症，少数病人因休克、昏迷而死亡. 二、生物学特性 （一）形态与染色 1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等 （二）培养特性： 1、需氧或兼性厌氧：生长最好 2、在2～３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐10%不能生长。 3、最适温度36℃，PH7.5—7.8（7.7） 4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。 5、血平板：可见溶血环。 （三）生化特性 1、分解GLU产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 2、H2S（－）、V-P（－）、靛基质（－）、 精氨酸（－） 3、甲基红（＋）、赖氨酸（＋）、溶血＋/- （四）抗原结构： O抗原 O1—O13 13个群。 H抗原： K抗原：K1—K70 65个型 缺：K2 K14 K17 K35 K62 三、检验操作要点 采样→样品处理→增菌培养→分离培养→3.5%氯化钠三糖铁培养基→嗜盐性试验→生化鉴定→动物试验→结果报告 1、采样： 患者粪便、呕吐物、可凝食品。 从海产品的体表面，肠内容物，鳃等取样 包装物，炊具用具。 快，不宜低温保存。 2、增菌培养：Nacl结晶紫增菌液，37℃ 8～16小时。 3、分离培养： Nacl蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，(绿)兰色，直径2—4mm 嗜盐选择性平板：直径2.5mm，圆整或不齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润。 4、3.5%Nacl-TSI 培养37℃ 24小时 5、镜检：应为革兰氏阴性，无芽胞多形态，两端浓染。 6、嗜盐性试验： 将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37℃ 24小时，观查生长情况。盐含量0、3、7、9、11% ， 在3～7 %生长良好。 思考题： 1、副溶血性弧菌的形态与染色有何特点。 2、副溶血性弧菌的生化特性中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是副溶血性弧菌。 3、副溶血性弧菌在TSI，Nacl蔗糖，嗜盐选择性平板上培养特征如何？ * * * ０　　３　　７　　９　　11 * *