毛果芸香碱缓释药膜兔房水药代动力学及局部安全性研究.pdfVIP

中文摘要 目的：设计和制作符合结膜囊解剖结构的“半月形”药膜模板，制备1%半月形硝酸毛果芸 香碱缓释眼用药膜；观察其在兔眼应用的药代动力学特征及局部毒性反应，评价其相对生 物利用度和局部安全性；开发、研制硝酸毛果芸香碱新剂型，为青光眼的治疗提供安全、 可靠、有效的缓释药物。 方法：1、健康新西兰白兔54只，雌雄不限，体重2～3kg，裂隙灯显微镜下检查无眼疾。 随机分成9组，每组6只兔（6眼），每组兔右眼为实验组，左眼为对照组。右眼嵌入1%硝 酸毛果芸香碱缓释药膜，左眼用微量取样器量取1%硝酸毛果芸香碱滴眼液50μl，滴入结膜 囊。给药后分别于0.5、1、2 、3、5、7、10、15及24h抽取房水进行定量分析。二氯甲烷提 取房水中所含的药物，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC ）法测定房水中的药物浓度，药 代动力学参数采用3P87药代动力学计算软件计算求得。比较两种剂型的毛果芸香碱药代动 力学特征。 2、健康新西兰白兔12只，雌雄不限，体重2～3kg，裂隙灯显微镜下检查无眼疾。 随机分成A 、B两组，每组6只兔（6眼），每组兔右眼给予1%硝酸毛果芸香碱缓释药膜或 滴眼液，左眼为空白对照组。单次给药刺激性实验：所有兔右眼给药一次后分别于1、2 、 4 、24 、48和72小时利用裂隙灯显微镜观察兔眼情况；多次给药刺激性试验：药膜组每24 小时（根据药代动力学实验结果制定）给药一次，滴眼液组每天滴眼4次（根据临床用药 特点：8、12、16和20点用药），连续给药5天，每天给药前及最后一次给药后1、2 、4 、 24 、48和72小时用裂隙灯显微镜观察兔眼结膜、角膜及虹膜情况，并按“Draize”标准进行 刺激性评分。 3、健康新西兰白兔9只，雌雄不限，体重2～3kg，裂隙灯显微镜下检查无眼疾。随机分为 正常组3只（6眼）；余6只兔（12眼）右眼为实验组，左眼为对照组，右眼嵌入1%硝酸毛 果芸香碱缓释药膜，左眼用微量取样器量取1%硝酸毛果芸香碱滴眼液50μl，滴入结膜囊。 药膜组每24小时给药一次，滴眼液组每天滴眼4次，连续用药30天后，经耳缘静脉空气栓 塞处死兔子，取结膜和角膜组织标本，分别行光镜和扫描电镜检查，观察局部毒性反应。 结果：1、反相高效液相色谱法检测可将毛果芸香碱与其它杂质很好分离，最低检测浓度 为0.05μg/ ml ，毛果芸香碱在房水中的平均回收率为99.1% 。根据房水药代动力学标准曲线， 采用RP-HPLC法测得的用药后部分时间点1%硝酸毛果芸香碱缓释药膜组的房水药物浓明 显高于1%硝酸毛果芸香碱滴眼液组，结果有明显统计学差异（P0.05 ）。实验组和对照组 用药后房水达峰时间分别为3h和0.5h，达峰浓度分别为6.55±0.32μg/ ml和4.33±0.29μg/ ml 。 药物消除半衰期分别为11.13h和1.93h。实验组药物的房水浓度-时间曲线下面积（AUC0-180 ） I 是对照组的1.92倍，实验组房水达峰浓度是对照组的1.51倍(P0.05) 。 2、单次给药刺激性实验，所有兔眼裂隙灯下检查眼部情况未见任何刺激性症状。多次给 药刺激性实验，实验组1兔眼结膜轻度水肿；对照组1兔眼结膜轻度水肿、流泪，1兔眼出 现少量白色分泌物；按“Draize”标准评分实验组与对照组分别为0.17和0.33，均小于3，认 为两药对眼局部均无刺激性，两组评分差异无统计学意义（P ＞0.05 ）。 3、局部毒性反应实验:结膜组织光镜下炎症细胞计数，正常组、实验组和对照组炎症细胞 数分别为35.83±5.98、58.17±6.55和113.17±6.85，经多样本均数间两两比较的SNK检验，按 α=0.05水准，对照组均数最大，实验组次之，正常组最小，两两之间均数差异有统计学意 义。角膜扫描电镜见角膜上皮细胞边缘不规则、细胞皱缩、细胞间距增宽、微绒毛丢失、 细胞空洞和暗细胞增加，但对照组角膜上皮损伤较实验组明显（P0.05 ） 结论：1%毛果芸香碱缓释药膜与1%毛果芸香碱滴眼液相比，达峰时间延后，达峰浓度提 高，消除半衰期延长，提示其相对生物利用度提高，作用时间延长，起到缓释的作用，可 明显减少用药次数；单次刺激性和多次刺激性实验均无刺激性反应；连续用药一个月后见 结膜炎症细胞增生、角膜上皮微细结构改变，但较对照组为轻，说明其为一种局部安全、 可靠的新剂型。 关键词：毛果芸香碱；药代动力学；缓释系统；RP-HPLC ；毒性反应