脑缺血神经细胞和星形胶质细胞死亡途径及EPO干预研究.docVIP

脑缺血神经细胞和星形胶质细胞 死亡途径及EPO干预研究 摘 要 目的 通过观察大鼠持续性局灶脑缺血后细胞形态学的变化、免疫组化的表达，明确脑缺血后神经细胞和星形胶质细胞的死亡途径及EPO对细胞死亡的影响，为脑缺血治疗寻求新的契机。 方法 78只SPF级雄性SD大鼠，随机分为5组：假手术组6只，电镜对照组2 只，免疫组化实验组30只，电镜实验组10只，药物干预组30只。采用颈内动脉线栓环扎法建立大鼠大脑中动脉持续性缺血模型。药物干预组缺血30min后腹腔注射EPO。各实验组大鼠分别于缺血3h、6h、12h、24h、48h取脑，假手术组和对照组为术后24h取脑。电镜组直接断头取脑，单片脑组织TTC染色定位取缺血中心区和边缘区脑组织，LKB5超薄切片枸橼酸铝和醋酸铀染色，JEOL100透射电镜下观察；其余各组以固定液灌注取脑，常规固定包埋切片，HE、TUNEL和GFAP染色，假手术组和实验组还行GFAP、TUNEL双标免疫组化染色，通过图像分析观察以上指标表达情况。 结果 光镜下缺血3h即可见中心区脑组织轻度疏松和细胞肿胀，随缺血时间延长胶质细胞肿胀明显，12h后星型胶质细胞难以辨认，神经细胞核变形，核固缩，可见大量深染的神经细胞，正常组织及细胞结构渐消失。缺血3h边缘区可见细胞周围间隙扩大，神经细胞和胶质细胞肿胀，随缺血时间延长神经细胞周围水肿明显加重，核固缩，星