白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因序列及分泌性酸性蛋白酶活性差异的探讨.docVIP

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因序列及分泌性酸性蛋白酶活性差异的探讨 硕士研究生：董正蓉 导 师：张 宏 副教授 摘 要 ERG11基因序列及分泌性酸性蛋白酶活性之间的差异，从而为白念珠菌病原真菌学和临床检验学中，究竟是选择白念珠菌的菌丝相还是酵母相为研究对象提供理论依据。 方法： 对12株分离自同一HIV阳性者的白念珠菌分别进行菌丝相与酵母相培养后，抽提基因组DNA，PCR扩增ERG11基因（包括部分上游和下游非编码区），PCR产物用AccⅠ和MunⅠ消化，消化产物进行琼脂糖凝胶电泳（PCR-RFLP）；选择其中5株白念珠菌，用下游引物对部分ERG11基因进行测序，比较两相细胞ERG11基因序列差异；用牛血清白蛋白培养基测定8株白念珠菌菌丝相与酵母相分泌性酸性蛋白酶的活性。 结果： CA-7﹑CA-14﹑CA-16和CA-17 的菌丝相与酵母相ERG11酶切图谱存在差异CA-7菌丝相与酵母相ERG11基因第1 547位点、1 587位点和1 617位点的碱基存在差异； 白念珠菌菌丝相与酵母相分泌性酸性蛋白酶的活力存在差异，菌丝相分泌性酸性蛋白酶的活力强于酵母相。 结论： 白念珠菌菌丝相与酵母相在DNA水平存在差异； 白念珠菌菌丝相与酵母相在蛋白质水平存在差异； 菌丝相是进行白念珠菌病原真菌学研究的适宜研究对象。 关键词：白念珠菌；菌丝相；酵母；氟康唑；PC