耐力训练和p53抑制剂对40周龄ICR小鼠骨骼肌自体吞噬相关基因表达的影响.pdfVIP

论 文 摘 要 骨骼肌就像是人体运动的代言人，为了创造和维持机械张力，肌肉细胞的组 织呈现高度的结构化。肌细胞内每时每刻都在发生各种变化，其中包括一些在分 解条件下的变化：蛋白质被调动起来，线粒体和肌浆网重塑，肌细胞核消失等。 日常的身体活动中，肌肉收缩可导致机械性的和代谢性的肌肉蛋白和细胞器的损 害或改变。已有研究认为，在衰老过程中分解代谢加强，机体发生一系列变化需 要加强自体吞噬途径对功能损害和废除分子进行清除，自体吞噬相关基因与骨骼 肌衰老过程有紧密关系。体育锻炼能促进机体新陈代谢，有效延缓细胞衰老，减 少细胞癌变机率，对自体吞噬这一过程可能有良性效应。肿瘤抑制蛋白质“基因 卫士”p53 ，参与自噬的调控，是细胞能量代谢，保持细胞氧化应激信号稳态， 预防肿瘤和延缓衰老的策略之一。然而，骨骼肌自体吞噬，尤其是线粒体对具体 运动方式发生特异性自体吞噬途径的基因表达机制还鲜为人知，与运动敏感性基 因表达有关的调控因子还知之甚少。 目的：观测4 周耐力运动和p53 抑制剂对40 周龄ICR 小鼠骨骼肌自体吞噬 相关基因表达的影响，通过ICR 小鼠p53/ARF 和PUMA/BAX 信号通路相关基 因表达的转录对自体吞噬和线粒体自体吞噬及氧化功能的控制作用的影响进行 研究，以期对线粒体衰老学说有新的认识，并通过运动干预对其的影响进行新的 探索。 方法：将40 只雄性ICR ，40 周龄，体重45 ±5g 随机分成对照组，Pifithrin-α 组，Pifithrin-α 耐力训练组，Pifithrin-μ 组，Pifithrin-μ 耐力训练每组8 只。Pifithrin-α 耐力训练组和Pifithrin-μ 耐力训练进行4 周跑台训练，每周训练6 天，每天一次， 训练 40 分钟。经过饲养，末次运动结束 12-24h 内处死各组大鼠，用酶标仪测 GSH 的活性和 T-SOD 的浓度进行比较；Real-time PCR 测定鼠腓肠肌 p53 mRNA 、Bax mRNA 、Beclin-1 mRNA、LC3 mRNA 和Atg7mRNA 水平进行比较。 结果： （1）实验4 周后 P-α 组、P-α 训练组、P-μ 组、P-μ 训练组分别与C 组比较， 均无显著性差异；P-α 训练与P-α 比较，P-μ 训练组与P-μ 组比较，也均无显著 性差异。 （2 ）抗氧化能力：在SS 线粒体中，P-α 组与C 组比较GSH 浓度极显著性上 调；在IMF 线粒体中，P-α 训练组GSH 与C 组比较显著性上调；P-α 组与C 组 比较T-SOD 活性有显著性上调，P-α 训练组与P-α 组比较T-SOD 活性有显著性 上调。 （3 ）P-α 训练组和P-μ 训练组与C 组比较p53 mRNA 显著上调；P-μ 组，P-α 训练组和P-μ 训练组与C 组比较Beclin-1 mRNA 极显著上调，P-α 训练组与P-α 组比较，P-μ 组与P-μ 训练组比较Beclin-1 mRNA 极显著性上调；P-μ 组，P-α 训练组和P-μ 训练组与C 组比较Bax mRNA 极显著上调，P-μ 组与P-μ 训练组比 较Beclin-1 mRNA 极显著性上调。 （4 ）P-μ 训练组与C 组比较LC3 mRNA 和Atg7mRNA 极显著性上调；耐 力运动P-μ 组与P-μ 训练组LC3 mRNA 和Atg7mRNA 极显著性上调。 结论： （1）耐力训练和p53 抑制剂对老龄ICR 小鼠体重没有影响 （2 ）在线粒体亚组分中，增龄和注射 p53 抑制剂导致的氧化应激损伤和是否 可以通过耐力运动得到缓解的效果不同。 （3 ）耐力训练可上调自体吞噬相关基因LC3 ，Atg7 ，Beclin-1mRNA ，表明自 体吞噬有增强的趋势，可能是由于运动过程分解代谢加强，需要清除更多的功能 缺损的分子。 （4 ）p53 抑制剂可通过p53 对线粒体自体吞噬可能通路影响与自体吞噬相关基 因的转录。 【关键词】骨骼肌；自体吞噬；衰老；耐力运动；氧化应激；p53 ；Bax ；Beclin-1 ； LC3 ；Atg7 ABSTRACT Skeletal muscle