大蒜果聚糖的一级结构研究.pdfVIP

摘 要 大蒜可药食兼用，其含量最高的功能性成分是大蒜果聚糖，具有抗氧化、抗病毒、增 强免疫力、保护肝脏等多种功效，在食品、药品和化妆品等领域中有很大的应用潜力。大 蒜果聚糖生物活性的大小，与其结构有重要关系。但大蒜果聚糖的结构至今仍不清楚。本 论文拟通过甲基化、水解、气质联用测定等手段，研究大蒜果聚糖的结构。所获得的主要 结果是： (1) 大蒜经水提、阳离子交换树脂分离、酒精分级沉淀、DEAE-52 和 Sephadex G-100 柱层析获得大蒜果聚糖，Sephadex G-100 柱层析法鉴定其为纯品。 (2) 优化了硫酸水解大蒜果聚糖的条件。影响大蒜果聚糖水解度的因素依次是水解温 度＞水解时间＞硫酸浓度，最佳因素组合是硫酸浓度为 0.02mol/L，70℃，水解 2h ；最高 水解度为 76.19%，此时条件为：硫酸浓度为 0.020 mol/L，水解温度为 70℃，水解时间为 2.5 小时。 (3) 优化了硫酸水解甲基化大蒜果聚糖的条件。影响全甲基化大蒜多糖水解度的因素 依次是硫酸浓度＞水解温度＞水解时间，最佳因素组合是硫酸浓度为 0.40 mol/L，100 ℃， 水解6 h ；最高水解度为34.28%，此时条件为：硫酸浓度为 0.40mol/L，100℃，水解 7 个 小时；三氟乙酸（TFA ）水解甲基化大蒜果聚糖：测得最高水解度为65.87%，此时条件为： TFA 浓度为 0.5mol/L，100℃，水解4 个小时, 最佳因素组合是 TFA 浓度为 0.50 mol/L， 100℃，水解 6h 。用TFA 水解甲基化大蒜果聚糖所得到的水解度大于用硫酸水解，而且甲 基化大蒜果聚糖在 TFA 中溶解充分，这表明TFA 更适用于水解甲基化大蒜果聚糖。 (4) 为分析成脎、成腙反应的机理，并依据其反应机理合成多糖的衍生物，将苯肼、 2,4-二硝基苯肼与5%葡萄糖、果糖溶液反应，检测其反应速度，再通过质谱（MS ）和薄板 层析（TLC ）检测其反应产物。结果表明：成脎反应产物多，反应速度快，葡萄糖、果糖 成脎时间分别是5.3分钟、2.4分钟，葡萄糖和果糖的成脎反应都发生在C 和C 位，为双取 1 2 代反应，反应产物两种以上；成腙反应速度慢、产物少，2,4-二硝基苯肼与葡萄糖、果糖 I 溶液反应成腙时间均在24小时或更长，反应分别发生C 或C 位上，为单取代反应，反应产 1 2 物仅一种。分析表明羰基试剂的空间效应和电子效应影响这两种糖的取代数量和反应速 度。 在生成该衍生物的反应中，容易发生副反应，即羰基试剂溶液中的乙酸与苯肼、2,4- 二硝基苯肼反应生成乙酰苯肼和2,4-二硝基乙酰苯肼。 (5) 把大蒜果聚糖甲基化后水解，还原，乙酰化，经 GC-MS 联机分析，测定出的大蒜 果聚糖的分支度高于 17%。 关键词：大蒜(Allium Sativum L.) ；大蒜果聚糖；水解度；3,5-二硝基水杨酸比色法；分支 度 II Abstract Garlic can be used as food and medicine. Bioactivities of garlic fructan (GF), which is the main functional component in garlic, have been reported such as immunity regulatory function. GF has great applied potential in the field of food, medicine and cosmetic. GF’s bioactivity closely relates to its molecular structure. However, the GF’s structure is still unclear. This