聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响.pdfVIP

《 》 4 5 癌症 ： !!# $%’()( *+,-’./ +0 $.’1(-2 3##32 3 ! !# !!# 6 !!7 ·技术与方法 · !# 聚合酶对变性高效液相色谱 在基因突变检测中的影响 柳满然 潘凯枫 王 ， 吕有勇! 2 2 4 北京大学临床肿瘤学院，北京市肿瘤防治研究所，北京肿瘤分子生物学实验室，北京!###79 5 【 】 （ ） 摘 要 背景与目的：变性高效液相色谱 ， 是最近发 N(’.M,-’I %I%8K(-0+-G.’1( /O,N 1%-+G.M+I-.K%H PQRS$ 展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术，在工作中我们发现某些因素，尤其是P=T 聚合酶干扰PQRS$ 分 辨力。本文详细地分析了具校正功能和非校正功能的P=T 聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响， 旨在寻找更适合 分析的 聚合酶。方法：选择长度为 、 、 的 个代表性的片段用于 PQRS$ P=T 3: LK 7 !E LK @# LK 7 分析。选择 种品牌的 聚合酶， 种 聚合酶， 种具校正功能的 聚合酶 PQRS$ A.O P=T ! TGK/8A.O I+/N P=T 9 P=T （ ） R0, 和U(’M ，用这 !! 种酶扩增同一P=T 片段，并进行PQRS$ 检测，分析并鉴定它们对PQRS$ 峰型的影响。结果： A.O P=T 聚合酶对PQRS$ 分析产生两种明显的负面影响。一是在PQRS$ 图谱的主峰前，形成一个额外小峰，影响 PQRS$ 对杂合双链的分辨能力。另一种影响是难以形成正常的PQRS$ 色谱图，导致PQRS$ 检测的失败。具校正功 能的P=T 聚合酶和A.O I+/N P=T 聚合酶对PQRS$ 几乎不产生这些负面影响。结论：具校正功能的P=T 聚合酶比 聚合酶更适合于 突变或 分析，尤其是 含量高的小片段或其它容易受干扰的片段应首选 A.O PQRS$ V=R ?$ R0, P=T 聚合酶用于PQRS$ 分析。 关键词：变性高效液相色谱技术； 聚合酶；基因突变筛查 P=T 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： 4 5 WE@9