垂枝杉种质资源的RAPD 鉴定及遗传多样性研究.pdfVIP

维普资讯 第 23卷 第 2期 华 中 农 业 大 学 学 报 VO1．23 No．2 2004年 4月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Apr．2004，256~ 260 垂枝杉种质资源的 RAPD鉴定及遗传多样性研究* 宋丛文 ’ 许业洲 ’ 胡兴宜 ’ 管兰华。’ (华中农业大学园艺林学学院，武汉430070；。湖北省林业科学研究院，武汉 430079； 。湖北省林木育种中心，武汉 430079) 摘要 利用 RAPD标记对垂枝杉种质资源进行了遗传多样性分析，并与杉木其它类型作对照，对其进行鉴 定。结果表明：垂枝杉群体具有较高的遗传多样性．群体间变异 占总变异的15．6 ；3个垂枝杉群体遗传相似度 高，与其它杉木类型的遗传相似度低 ；垂枝杉具有稳定的遗传性和一致的表现型。从分析结果可以得出垂枝杉 是杉木的一个 自然变异类型。 关键词 垂枝杉；RAPD；种质资源 中图法分类号 S718．554．2 罗田垂枝杉是湖北省20世纪 70年代发现的一 行干燥。试验所用的随机引物购 自Operon公司， 种杉木优 良变异类型，具有生长快、干形通直圆满、 DNA聚合酶Taq购 自大连宝生物有限公司，dNTP 材质优 良等优 良性状，其区别于其它杉木类型的主 购 自上海生物工程公司。 要形态特征是侧枝 自然下垂，生长6～7a后 自然脱 1．2 方 法 落，树冠窄小，冠高比一般为 1：3左右。经过多年 1)样 品 DNA 提取纯化。垂枝杉样 品的总 的引种栽培和子代林观测，垂枝杉的形态特征和生 DNA提取参考BoomR 的CTAB法_8]。取叶片材 物学特性具有稳定的遗传性。 料0．1g于液氮中迅速研磨成粉末，转入预热的600 近年来，随着分子遗传学的发展，大量DNA分 ICTAB提取液中进行提取，然后加入等体积 子标记技术被广泛用于各物种的品种鉴别及遗传分 氯仿 ：异戊醇(24：1)抽提 2次，再用 70 的乙醇 析等研究，尤其是 RAPD技术，以其快速、简捷、高 漂洗DNA，沉淀 2次，最后将真空干燥的DNA加 效等优点，更是被广泛应用，如各品种指纹图谱的构 适量1×TE溶解即可 。 建_1]、遗传连锁图谱的构建[。“]以及各物种的品种 2)RAPD分析。本研究参考部分杨树的RAPD 鉴定 等。 反应体系_l3]，结合杉木及垂枝杉 自身的特点，建立了 本研究应用RAPD分子标记手段，以3个不同 其RAPD分析的稳定反应体系。PCR反应体系为 地域的垂枝杉群体为对象，并以其它杉木类型为对 2O I，其中，DNA模板量为 20ng左右 (2 L)， 照，对垂枝杉种质资源进行了鉴定和遗传多样性分 弓I物 2 I (0．5 #mol／I) ，dNTP 2 I 析，旨在为垂枝杉育种提供科学依据。 (200~mol／I)，Taq酶 0．2 L(1U)，10×缓冲液 2 I (200mmol／I Tris—HC1，pH 8．3，500 1 材料与方法 mmol／I KC1， 0．01 Gelatin， 25 mmol／I 1．1 材 料 MgC1z)。扩增反应程序为：首先，94℃预变性2min 垂枝杉样品采集于湖北省罗田县大畸乡20 ， 然后 38个循环 (94℃ 30S，42℃ 30S，72℃ 1．5 份)、红安县老君山林场 (20份)和湖北省林科院九 min)，最后 72℃延伸 7min。扩增产物在 1．0 琼 峰试验林场(8份)。另外，为了鉴别垂枝杉与其他 脂糖凝胶中电泳，经 EB染色后在紫外灯下观察照 杉木变种的不同，我们采集了若干独杆杉、柔叶杉及 相。根据各样品DNA扩增产物的电泳谱带，记录 普通杉木样品作为对