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维普资讯
18卷 J期 生 物 I 程 学 报 VOl l8 Nn l
2002年 1月 Chinese ㈣ fofB c^ January 2002
何首乌毛状根培养及其活性成分的产生
王 莉 于荣敏 张 辉 程克棣
c比 药科上学l1牺技术研究室 ， 1[0016
!l中 医学科学院药物研究肝生物台成实验室 ，北 j lOlHl50)
摘 要 利用发根农杆菌 I．BA9402诱导药用植物何 鸟产生毛状根 PCR扩增和 Southern印迹杂交实验汪实发根
农杆菌 中R质粒的TDNA片段 已整合进 ^植物棱基 l【j绀q， 经过基本培养基 的筛选和毛状根生K功力学的考
察 确 ru『』 鸟毛状根在 MS培养基中的最佳继代时间为 30d左右 。HPLC实验迥4定结 果 示 ．毛状根培养物 中
大黄酸的古量是慷植物的285倍。
关键词 何首乌．发根农杆苗 ，毛状擞培养 ．葸醌炭化台物
中图分类号 Q945 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2002】O1—0069—05
药用植物何首乌 ，又名首乌 ．赤首乌 ，为蓼科植 LBA9402在 YMB培养基中4℃斜面保存 感染前划
物何首乌 (PolygonlummMtfliomm Thunb )的干燥块 线接种在 YMB固体培养基上，27℃培养 24h，活化2
根。具有解毒 、消疮痈 、润肠通便等功能 。现代药 ～ 3次后 ，挑取单菌落转接在 YMB液体培养基 中，
理学研究表 明，何首乌具有抗衰老 、抗菌和增强机体 27℃，110r／min振荡培养 16h．即可用于毛状根 的诱
免疫功能等 怍用 ，其 中蒽醒娄成分具 肓上皮生长因 导
子受体酪氨酸蛋 白激酶抑制剂活性 ．是 目前抗癌药 1．1．3 毛状根的诱导 ：用接种感染法转化何首乌外
物研究的热点之一 。 植体 。叶、叶柄 、茎与活化好的菌液共培养 20rain，
发根农杆菌 (Agroba~cterium rhizogenes)中含有致 取出．无菌水冲洗 3次 ．无菌滤纸擦干后置于 MS固
使植物产生毛状根的R质粒．在 vjr医基因产物协 体培养基上 ．25屯．暗培养 待根长到 1．5cm左右
助下 ． 质粒中的T-DNA片段转移进植物核基闪组 时，从外植体上切下．转移至含500J~g／L头孢噻肟钠
中，就导致了毛状根的大量 出现 毛状根具有生 的MS固体培养基上除菌 ．每7d重复操作 1次 ，3次
长迅速 、生长和遗传稳定 、以及在无激素的培养基 E 岳转移到无抗生素的MS液体培养基中以建立毛状
生长等特点．它能够合成与原植物含量相 当或高于 根离体培养体系
原植物台量的次生代谢产物一 1．2 何首乌愈伤组织的诱导及培养
切取何首乌无菌小植株 的叶片．接种在含 NAA
1 材料与方法
1Omg／L，KT0 1mg／L的Ms固体培养基上，25℃．暗
1．1 何首乌毛状根的诱导 培养 2周后在叶片伤 口处产生愈伤组织。将愈仿
1．1_1 诱导材料 的选择与培养：何首乌带芽茎切 组织从叶片上切下．在相同的培养基上培养 ，每3周
段，经01％HgC1：消毒后，用无菌水冲洗干净，无菌 继代一次一
滤纸擦干，置于无激素的MS固体培养基上。2星期
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