LPS与巨噬细胞中htrα2的表达及相关性研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第3期，2013年5月 of Journal Sci—Tech Zh@ang University 2013 V01．30，No．3，May 文章编号：1673—3851(2013)03—0383—06 LPS与巨噬细胞中htra2的表达及相关性研究 韩文正1，武虎1，李晓艳1，李红艳1，姚韵靓2，郭科妮1，周秀梅1 (HtrAserine peptidase2，htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势，提示巨噬细胞中的htra2受 stomatitis 到LPS的调控。为了进一步证实LPS刺激的特异性，实验建立VSV(vesicularvirus)病毒感染巨噬细胞 模型，采用荧光定量PCR，免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞 产生效应的相关性；构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2一HA，采用ELISA，WesternBlot及荧光定量PCR 表达水平。 关键词：巨噬细胞；LPS；VSV；免疫荧光；IL-6 中图分类号：R392 文献标志码：A teinkinase)，N卜kB(nuclearfactor kappa-light— 0引言 chain-enhancerofactivatedBcell)等信号途径，引 近年来，人们对固有免疫的研究不断深入，主要 发细胞内一系列固有免疫分子的表达，如细胞因子 集中于树突状细胞、巨噬细胞、NK细胞在病毒、细 菌等病原微生物感染机体后产生的免疫调控过 necrosis kin-12)，TNF_a(Tumor 程[1]。固有免疫识别病原相关分子模式通过细胞表 factor-a)以及趋化 面的模式识别受体，目前已报道十多种类型的模式 识别受体[2]。其中TLR4是目前研究得比较深入的启动天然免疫应答，还是连接天然免疫和获得性免 模式识别受体家族成员之一，主要通过细菌的细胞 疫应答的枢纽[4]。 stomatitisvirus， 壁组成成分激活细胞内多种免疫应答效应，控制外 水疱性口炎病毒(vesicular 来微生物的感染。 脂多糖LPS(1ipopolysaccharide)是革兰氏阴性被细胞的TLR7-9识别，介导机体抗病毒的效应[5]。 细菌的细胞壁成分，能够引发多种免疫细胞发生形 态，功能以及细胞内基因表达的变化，并导致宿主细 定位于线粒体的丝氨酸蛋白酶，定位于线粒体的 胞因子失控的表达，引起严重感染、器官损伤以及休 brane 克等多种疾病的产生[3]。研究表明，LPS能够被细 domain)结构域，丝氨酸蛋白酶结构域，C端 胞表面的TLR4识别，并将信号传递至胞内，激发的结合结构域。Omi的成熟建立在N端的TM结 activated 下游的多条信号，如MAPK(mitogenpro— 构域的丢失[6]。Omi的高级结构是通过结晶学分析 收稿日期：2012—10～08 基金项目：国家自然科学基金；科研启动基金(1204807一Y) 作者简介：韩文正(1986一)，男，安徽萧县人，硕士研究生，主要从事肿瘤的靶向基因治疗研究。 通信作者：周秀梅，电子邮箱：zhouxiumei824@163．com 万方数据