高效表达乙型肝炎表面抗原的CHO工程细胞株的构建.pdfVIP

· · 中国生物制品学杂志2009 年12 月第22 卷第12 期 Chin J Biologicals December 2009 ，Vol. 22 No. 12 1172 中国图书分类号 Q789 文献标识码 A 文章编号 1004-5503 （2009）12-1172-04 【基础研究】 高效表达乙型肝炎表面抗原的CHO 工程细胞株的构建 1 1 1 2 1 1 时成波 徐军 王堃 贾重来 徐冬冬 盛军 【摘要 】 目的 构建高效表达乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的CHO 工程细胞株。方法 从pCIneo 质粒出发，构建含有改造 了稀有密码子的HBsAg S 基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶（DHFR）转录单位的新型表达载体，利用脂质体转染CHO ／ dhfr- 细胞，经3 轮氨甲喋呤（MTX）梯度加压筛选和单克隆筛选，获得高效表达HBsAg 的CHO 工程细胞株，并对HBsAg 的分泌动态 - 进行检测。结果 所构建的新型表达载体pCI-DS 经PCR 及酶切鉴定，证明构建正确，转染CHO ／ dhfr 细胞后，经筛选得到高效 6 表达HBsAg 的CHO 工程细胞株3F9，表达量达9. 21 μg ／ 10 个细胞·48 h 。单层细胞培养动态表明，3F9 株细胞能在40 d 内稳 定高效表达HBsAg。结论 已成功构建稳定高效表达HBsAg 的CHO 工程细胞株，为提高HBsAg 的产量创造了条件。 【关键词】 乙型肝炎表面抗原；中国仓鼠卵巢细胞；高效表达 Construction of Recombinant CHO Cell Strain for High Expression of HBsAg △ △ SHI Cheng-bo , XU Jun, WANG Kun, et al （Changchun Institute of Biological Products, Changchun 130062, China） 【Abstract 】 Objective To construct a recombinant CHO cell strain for high expression of HBsAg. Methods Based on plas－ mid pCIneo, a novel expression vector was constructed, containing a HBsAg gene of which the rare codon was modified and a DHFR transcription unit of which the promoter was attenuated. CHO ／ dhfr- cells were transfected with the constructed expression vector in mediation of liposome, based on which a recombinant CHO cell strain for high expression of HBsAg was screened by three cycles of MTX gradient pressure screening followed by monoclonal screening, and determined for secretion of HBsAg. Results Both PCR and