基于表面吸附固定法构制孔雀石绿免疫传感器的研究.pdfVIP

东 莞 理 工 学 院 学 报 第 19卷第 5期 JOURNALOFDONGGUANUNIVERSITY OFTECHNOLOGY V01．19No．5 2012年 1O月 0ct． 2012 基于表面吸附固定法构制孑L雀石绿免疫传感器的研究 周亚民 彭敏 (东莞理工学院 化学与环境工程学院，广东东莞 523808) 摘要：提 出一种基于石蜡电极表面吸附孔雀石绿抗体的电化学免疫传感器，通过竞争型免疫检测法测量 水体中残留孔雀石绿。对免疫传感器构制参数—— 电极表面预处理、抗一MG溶液pH、抗一MG溶液浓度和 抗一MG抗体吸附时间进行 了研究；对传感器测量过程参数进行 了优化，传感器对孔雀石绿检测的线性范围 为 I．5—780 g／L，检测孔雀石的回收率在93％一116％。 关键词：孔雀石绿；免疫传感器；石蜡 电极 中图分类号：0241 文献标识码：A 文章编号：1009—0312 (2012)05—0064—06 在水产养殖过程中，孔雀石绿 (分子式为C：，H：C1N：，MG)常作为杀菌剂和抗寄生虫药，用于预 防与治疗水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等 。该类物质在鱼体内代谢为隐色孔雀石绿和隐色 结晶紫，会残留于生物体内，食用经MG治疗的水产品后，人的免疫系统和繁殖系统受到一定的影响。 欧美等国在水产养殖中使用孔雀石绿和结晶紫有严格限制，规定在食用水产品中孔雀石绿 (含隐色孔 雀石绿)和结晶紫 (含隐色结晶紫)最高残留总量不得超过2 g／kg。由于孔雀石绿价格低廉，对鱼病 防治效果高，替代品少，检测和管理不到位等原因，不少渔民还在小范围使用孔雀石绿。孔雀石绿进入 水体后，除了进入鱼体，相当一部分存在水体中，小部分被池塘底泥吸附，污染池塘底泥，不可避免地 带来后续水产养殖产品中的孔雀石绿残留问题和环境污染问题 。随着人们对食品安全的要求 日益 提高，水产品的药物残留问题已经引起社会的普遍关注，有必要提高水产养殖环境孔雀石绿残留检验水 平。目前，检测孔雀石绿残留大多采用高效液相色谱法、液一质联用法、气一质联用法、薄层色谱法、 普通分光光度法等 -2。酶联免疫法 (ELISA)具有快速、准确和无污染等优点，本文提出一种基于 石蜡 电极表面吸附孑L雀石绿抗体的电化学免疫传感器，通过竞争型免疫检测法测量水体中残留孔雀石 绿。 1 实验部分 1．1 试剂 孔雀石绿 (MG)，辣根过氧化物酶 (HRP)标记的孔雀石绿结合物 (HRP—MG)，孔雀石绿抗体 MG—Ab，牛血清白蛋白 (BSA)购 自深圳市博奥通科生物制品有限公司。石墨粉和固体石蜡购 自上海 化学试剂公司。HRP、3，3’，5，5’一四甲基联苯胺 (TMB)购 自Sigma公司。培育液是含 1％BSA (w／w)和 1mM的EDTA的0．1M 的tris—HC1溶液，洗液为pH7．4的0．1M磷酸盐缓冲溶液，酶催化 反应底物溶液为含0．5x10 M的TMB和 1x10。M的H：O：的pH5．0的柠檬酸磷酸盐缓冲溶液。不 同浓度的MG和HRP—MG溶液用含有 1％ (w／w)的牛血清蛋 白的0．1Mtris—HC1缓冲溶液稀释标准 MG和HRP—MG溶液而得。 1．2 敏感电极的构制方法 将 1：1(w／w)的石蜡、碳粉加热搅拌均匀制成糊状，将其填人聚四氟乙烯管中，压紧后在金相 收稿 日期 ：2o12—04—18 基金项 目：东莞市科技项 目 (201010814010)；广东省教育部产学研结合项 目 (2oo9Bo9o3o0358)。 作者简介：周亚民 (1968一)，男 ，湖南衡阳人，副教授，博士，主要从事分析科学研究。 万方数据 万方数据 东 莞 理 工 学 院 学 报 2012正 《 8 ∞ vu 0d∞8皇 目0