溶藻弧菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备.pdfVIP

第 33 卷 第 4 期 广东海洋大学学报 Vol.33 No.4 2013 年 8 月 Journal of Guangdong Ocean University Aug. 20 13 溶藻弧菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1,2,3 王 蓓 ，梁 军 ，简纪常 ，鲁义善 ， 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1,2,3 2,3,4 蔡双虎 ，黄郁葱 ，汤菊芬 ，蔡 佳 ，吴灶和 （1. 广东海洋大学 水产学院 ，广东 湛江 524025 ；2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 ，广东 湛江 524025 ； 3. 广东省水产经济动物病害控制重点实验室 ，广东 湛江 524025 ；4. 仲恺农业工程学院 广东 广州 510225 ） 摘 要 ：采用溶藻弧菌 ATCC 17749 菌体作为抗原免疫新西兰大白兔 ，制备兔抗溶藻弧菌多克隆抗体 ；利用柠 檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金及胶体金 -抗体结合物 ，并将其喷涂在玻璃纤维膜上冷冻干燥 ；在硝酸纤维素 膜上包被兔抗溶藻弧菌多克隆抗体和羊抗兔 IgG 分别作为检测线和控制线 ；将处理后的玻璃纤维素膜 、硝酸纤 维膜 、样品垫及吸水纸组装成双抗夹心试纸条 ，并对试纸条灵敏度 、特异性 、稳定性进行评价 。结果表明 ，制 备的兔抗溶藻弧菌多克隆抗体的效价可达 1 ∶512 000 ；胶体金溶胶的最佳制备条件为 ：加入 1.8 mL 10 mg/mL 的柠檬酸三钠 ，500 W 微波炉 中火加热 10 min；试纸条检测线和质控线的抗体最佳包被量分别为 8.0 mg/mL 和 6 1.0 mg/mL；试纸条检测灵敏度为 1 ×10 cfu/mL ，特异性试验显示 ，试纸条与哈氏弧菌 、副溶血弧菌 、霍乱弧 菌 、拟态弧菌 、美人鱼弧菌 、弗氏弧菌 、河流弧菌 、创伤弧菌等 8 株菌无交叉反应 ；稳定性试验表明 ，试纸在 4 ℃干燥条件下能稳定保存 5 个月以上 。制备的溶藻弧菌多克隆检测试纸条可灵敏 、较特异地检测源自病鱼的 溶藻弧菌 ，整个检测过程可在 10 min 内完成 ，适用于溶藻弧菌的快速检测 。 关键词：溶藻弧菌 ；胶体金 ；免疫层析 ；试纸条 中图分类号：S941.42 文献标志码：A 文章编号：1673-9159 （2013 ）04-0049-07 Development of Immunochromatographic Colloidal Gold Test Strip for Rapid Detection of Vibrio alginolyticus WANG Bei1,2,3, LIANG Jun1,2,3, JIAN Ji-chang1,2,3, LU Yi-shan 1,2,3, CAI Shuang-hu 1,2,3, HUANG Yu-cong1,2,3, TANG Ju-fen1,2,3, CAI Jia 1,2,3, WU Zao-he2,3,4 （1. Fisheries College , Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524025, China; 2. Guangdong