异丙酚对大鼠海马神经元缺氧和谷氨酸损伤影响.docVIP

依托咪酯对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制 秦晓辉,米卫东,张宏 （中国人民解放军总医院麻醉科,北京 100853） 摘要: 目的 静脉麻醉药依托咪酯 (etomidate) 可能通过兴奋GABAA受体产生麻醉作用，而其对中枢神经元缺氧损伤的保护作用一直存在争议[1-5]。一些在体实验显示：异丙酚、地西泮、巴比妥类及依托咪酯等可能通过增强GABAA受体功能而对中枢神经的缺血再灌注损伤具有一定的保护作用[2-5]。本实验拟用原代培养的大鼠海马神经元作为研究对象，排除整体实验中循环、体液、内分泌等复杂因素的影响，观察不同剂量依托咪酯对离体大鼠海马神经元缺氧的保护作用，并探讨这一保护作用的可能机制。方法 大鼠海马神经元原代培养10天，随机分为①空白对照组；②缺氧对照组；③依托咪酯0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg·L-1组。应用MTT法测定神经元在缺氧及给药情况下存活率的变化。采用激光扫描共聚焦显微镜动态、连续监测单个海马神经元[Ca2+]i随缺氧或加入谷氨酸、KCl前后的实时变化及依托咪酯对[Ca2+]i变化的影响。结果 依托咪酯在1.2～4.8 mg·L-1范围内，可剂量依赖性地降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率（P0.05）KCl诱发的[Ca2+]i升高主要是通过激活电压门控性钙通道，引起Ca2+内流。谷氨酸诱发的[Ca2+]i升高主要是通过激活NMDA受体，引起Ca2+内流。0.3～.8 mg·L-1依托咪酯能抑制缺氧及50 mmol·L-1 KCl引起的[Ca2+]i升高（P0.05），仅在4.8 mg·L-1时才抑制1 mmol·L-1谷氨酸所致的[Ca2+]i升高（P0.01）。结论 依托咪酯能降低海马神经元缺氧性损伤的死亡率，抑制缺氧及高浓度KCl和谷氨酸等诱发的[Ca2+]i升高，表明依托咪酯对培养的海马神经元缺氧损伤有保护作用。这种作用在较低浓度时，主要通过抑制Ca2+经电压依赖性Ca2+通道涌入细胞内，减轻细胞内的钙超载，从而起到一定的抗缺氧作用；在较高浓度下，这种保护作用可通过依托咪酯对电压依赖性Ca2+通道和NMDA受体耦联Ca2+通道的同时抑制而实现。讨论 在人类，达到意识消失的依托咪酯血浆浓度为0.3～0.5 mg·L-1。本实验证实临床相关浓度的依托咪酯对离体神经元缺氧损伤的保护作用有限，高浓度依托咪酯才有明显的保护作用。但依托咪酯有较高的脑/血分配系数，全麻期间依托咪酯在中枢神经系统的浓度明显高于血浆浓度。未来研究还需进一步建立尽可能接近临床状况的模型，来验证其神经保护的临床价值。 关键词:海马神经元；缺氧；钙离子；依托咪酯