滋阴填髓益脑法对局灶性脑缺血-再灌注慢性损伤大鼠Bcl-2和Bax表达的影响.pdfVIP

一 24一 湖北中医杂志2013年 1月第35卷第 1期 滋阴填髓益脑法对局灶性脑缺血 一再灌注慢性损伤大鼠 Bcl一2和 Bax表达的影响 丁念’，邹亮 ，周晶 ，指导：张觉人。 (1．武汉市中医医院，湖北 武汉 430014；2．武汉市第一医院，湖北 武汉 430022) 摘 要：目的 观察滋阴填髓益脑法对脑缺血再灌注损伤大鼠Bd一2和Bax表达的影响。方法 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻 塞 (MCAO)模型，采用链酶亲和素一生物素复合物 (SABC)免疫组化染色方法检测Bel一2和Bax的表达。结果 滋阴填髓益脑法对 缺血性大鼠Bel一2表达显著增加，而Bax表达却相对减少，上调Bcl一2／Bax的比值。结论 滋阴填髓益脑法在大鼠脑缺血再灌注实 验中可以减少再灌注损伤后出现的细胞凋亡。 关键词：局灶性脑缺血；大鼠；滋阴填髓益脑法；Be1—2；Bax；实验研究 中图分类号：R743 文献标识码：A 文章编号：1000一o704(2013)叭一0024—03 滋阴填髓益脑法及滋阴填髓益脑方系我省知名中医张觉人 草、桑椹子、茯苓 、丹皮、泽泻、白蒺藜各9g，菊花 12g，枸杞子 10g 教授在多年临床经验上，结合中医辨证论治理论研制而成的纯 组成。以上药物由湖北省药材公司药店购得饮片，经武汉市中 中药制剂。是通过滋阴填髓益脑以髓海得充、亢阳得制的一种 医院药剂科鉴定)，采取水煎醇沉法，制备 (生药含量为2g／mL) 治法 ，临床运用于髓海不足的缺血性卒中特别是头颅CT、MRI提 水煎液，4℃保存备用。 示的腔隙性脑梗死已取得很好的疗效 。 Bel一2免疫组化试剂盒、Bax免疫组化试剂盒(均为武汉博 本课题前期研究发现，滋阴填髓益脑法治疗缺血性中风 的 士德公司产品)。 机制，可能是通过提高缺血再灌注慢性损伤大鼠的血清 T— 1．3 动物分组、模型制备与给药方法 SOD、Cu—Zn—SOD活性，降低血清 MDA浓度，有抗脑缺血再灌 1．3．1 分组：大鼠随机分为3组，分别为假手术组、模型组、滋阴 注损伤时脂质化过程，从而发挥脑保护 的作用 。本实验采用 填髓益脑方组，每组 15只。假手术组做动脉分离手术，不栓塞大 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，观察术后大鼠神经行为学、组织 脑 中动脉。模型组，滋阴填髓益脑方组均行大脑中动脉栓塞术。 病理学改变、免疫组化染色方法检测 Bel一2和Bax蛋 白，进一步 1．3．2 局灶性脑缺血再灌注模型制备：动物饲养及室温控制在 加深我们对腔隙性脑梗死损伤机制的理解 ，为滋阴填髓益脑法 2512左右，术前禁食 12h，采用采用改良ZeaLonga[4法制作 MA． 治疗腔隙性脑梗死进一步提供可靠的理论依据。 CO模型，大鼠用 10％水合氯醛(0．35mIM100g)腹腔注射麻醉后， 1 材料与方法 仰卧固定，颈部皮肤用碘伏消毒；颈部正中切开，沿胸锁乳突肌 1．1 实验动物 内缘分离肌 肉和筋膜，分离左侧颈总动脉 (CCA)、颈外动脉 雄性 sD大鼠，SPF级，体重25％一280g，华中科技大学同济 (ECA)和颈内动脉(ICA)，在 CCA远心端和近心端及 ECA处挂 医学院实验动物中心提供，实验动物合格证号为SCXK(鄂)20O4 线备用。用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。 — 2007。 然后在距CCA分又部4mm(根据情况适当调整距离)处剪一小 1．2 主要试验药物与试剂 口，将拴线插入到 ICA，这时用绕在 CCA远心端的细线轻轻系牢 滋阴填髓益脑方(由首乌、熟地、女贞子、山药、山茱萸、早莲 拴线。再灌注时轻轻提拉所 留线头直至抽出，即再灌注模型形 湖北中医杂志2013年 1月第35卷第 1期 Hubei1ournalofTcM JAN．2012．VoL34．No．1 一 25一 成。