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第九章 维生素类药物的分析 维生素是维持人类机体正常代谢功能所必需的一类活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节，体内不能自行合成，须从事物中摄取。这类药物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化学法和物理化学法，但目前常用的分析方法是化学法或物理化学法。 第一节 维生素A的分析 维生素A包括有 a. 维生素A1（视黄醇）活性最强 不饱和脂肪醇 主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油。在鱼肝油中维生素A多以各种酯类混合物的形式存在，其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯。 b.维生素A2（去H 维生素）30%-40% c.维生素A3（去水维生素）0.4% 一 结构和性质 （一）结构 维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烯，具有许多立体异构体。维生素A多为全反式。不同的异构体具有相似的化学性质，但具有不同的光谱特性和生物效价。 （二）性质 1.溶解性 由于是有机物，所以具有脂溶性，溶于乙醚、石油醚等有机溶剂中，在乙醇中微溶，在水中不溶。 2.不稳定性 由于有多个不饱和键，所以性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光所裂解，特别是在加热和金属离子存在是，更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化合物维生素醛或维生素酸。维生素A对酸不稳定，遇Lewwis 或无水氯化氢乙醇液，可发生脱水反应。其中V.A的醋酸酯比V.A稳定。由于不稳定性，所以应保存在凉暗处，并需充氮气或加入合适的抗氧剂。 3。紫外吸收特性 在325-328处有最大吸收，可用于鉴别和含量测定 4.与三氯化锑呈色 V.A在氯仿溶液中能与三氯化锑作用，产生不稳定的蓝色。可用于鉴别或用比色法测定含量 二. 鉴别实验 （一）三氯化锑反应 1.原理 V.A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。 2.机制：V.A和氯化锑（ 三价）中存在的亲电试剂氯化高锑（五价）作用形成不稳定的蓝色碳正离子。 3.方法 见书P207 4.注意事项 无水无醇条件下进行及其原因：水可使三氯化锑水解成氯化氧锑，而乙醇可以和正离子作用使其正电荷消失。所以仪器和试剂必需干燥无水，氯仿中应无醇。 （二）紫外吸收光谱法 1.方法 配制溶液，并立即用紫外分光光度计在300-400nm的波长范围内进行扫描，则应在348、367、389nm的波长处有三个尖锐的吸收峰，且在332的波长处有较低的吸收峰或拐点。 2.讨论 最大吸收波长与共轭程度有关：共轭程度越大，其波长也就越大。具体情况见P208 （三）薄层色谱法 第一种： BP（2000） 吸附剂：硅胶G 流动相：环几烷-乙醚（80：20） 显色剂：三氯化锑 第二种：USP（24） 硅胶 环几烷-乙醚（80：20） 磷镭酸 三.含量测定 先用紫外分光光度法代替反应专属性差、呈色不稳定的三氯化锑比色法。但由于三氯化锑比色法操作简便、快速，所以目前仍旧是食品或饲料中V.A含量测定的常用方法。 （一）紫外分光光度法（三点校正法） 1.三点校正法的建立 V.A在325nm-328nm的波长范围内具有最大吸收，可用于含量的测定。但其中有很多杂质在紫外区也有吸收，而干扰V.A的准确的含量测定。其中有其多种异构体、氧化降解产物、合成中间体和副产物等。采用“三点校正法”能够消除这些杂质的无关吸收的干扰。 什么是“三点校正法” ？ 三点校正法是指在三个波长处测得吸收度后，在规定的条件下以校正公式进行校正，再进行计算。这样就可以消除无关吸收的干扰。 注：V.A在325nm-328nm的波长范围内有最大吸收，其最大吸收波长随溶剂的不同而有所不同。具体数据见P209 表9-3。 2.测定原理 两点原理： （1）.杂质的无关吸收在310nm-340nm的波长范围内几乎成一条直线，且随波长的增大吸收度下降。 （2）.物质对吸收呈加和性的原理。 3.波长的选择 选择原则：一点选择在维生素A的最大吸收波长处 ，其他两点选择在的两侧各选一点（ 第一法（等波长差法） 第二法（等吸收比法） 4.杂质的吸收 对V.A有影响的杂质主要有以下几种： (1) V.A2 和V.A3 (2)维生素A的氧化产物 (3) 维生素A在光照下产生的无活性的聚合物 (4)维生素A的异构体等。 以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸收，干扰维生素A的测定。 5.测定方法 （1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯） 1）方法 见书上P210 2）计算 a.吸光系数E1%1cm b.求