Ad-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑癌效应的体内外实验.pdfVIP

生 物 工程 学报 ChinJBiotech2009。October25；25(10)：1538-1545 journals．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000-3061 cjb@irn．ac．cn @ 2009CJB,Allrightsreserved Ad-IL-24对MG．63入骨肉瘤细胞抑癌效应的体内外 实验 韩亚丽，缪竞诚，盛伟华，汪小华，井莹莹，单云波，刘铁连，包婉蓉，杨吉成 苏州大学医学部 细胞与分子生物学教研室，苏州 215123 摘 要：本研究旨在分析腺病毒携带的 儿一24基因在体内外对人骨肉瘤细胞生长抑制效应及其分子机制。将 Ad-儿． 重组腺病毒感染MG一63细胞，用荧光显微镜、RT-PCR法检测IL一24在 MG一63细胞中的转录和表达；MTT法、流式细 胞技术和 Hoechst染色法检测 IL一24基因的表达对MG．63细胞的生长抑制和凋亡效应；半定量 RT-PCR法检测儿一 基 因的表达对 MG63细胞中的bc1．2、bax、caspase一3相关基因表达的影响。用Ad一儿一24重组腺病毒在 MG．63骨 肉瘤荷 瘤裸 鼠的瘤体 内进行注射治疗，观察肿瘤生长变化，15d后处死裸鼠，摘除瘤体，称瘤重。并通过免疫组化法检测Bc1．2、 Bax、Caspase一3等与细胞凋亡相关因子的表达。结果表明Ad一儿一 重组腺病毒感染MG一63细胞后，能明显抑制MG．63 细胞增殖，并能通过上调细胞中bax、caspase一3和下调bcl一2基因表达，诱导细胞凋亡，呈现出典型细胞凋亡形态学变 化。Ad一／L．24重组腺病毒瘤内注射MG一63裸 鼠荷瘤骨 肉瘤移植瘤后，能显著抑制肿瘤生长，瘤重的抑制率可达52％，免 疫组化结果显示Ad．／L．24重组腺病毒能明显上调与细胞凋亡相关因子Bax和Caspase一3的表达和下调Bcl一2和CD34的 表达。本研究结果显示腺病毒介导的，L一2基因在体内外均可明显抑制MG一63人骨 肉瘤细胞的生长，诱导其凋亡，其机 制可能与下调bcl一2，上调 bax、caspase一3的基 因表达水平有关，由此为骨肉瘤的基因治疗提供实验依据。 关键词：儿一24基因，腺病毒载体，MG一63人骨肉瘤细胞，肿瘤抑制 Interleukin24inhibitsgrowthandinducesapoptosisof osteosarcomacellsM G．63／nvitroand ／nvivo YaliHan，JingchengM iao，WeihuaSheng，XiaohuaWang，YingyingJing，YunboShan，TielianLiu， WanrongBao，nadJichengYang CellandMolecularBiologyInstitute，CollegeofMedicine，SoochowUniversity，SuzhOU215123，China Abstract：Tostudytheinhibitoryeffectandanti—cancermechanismsofinterleukin24 (／L一24)onhumanosteosarcomacell MG一63，wedelivered／L一24intoMG一63cellsinvitroandinvivobyadenovirus．Theexpressionlevelof儿 一24wasdetectedby RT-PCR andfluorescencemicroscope；thegrowthinhibition，apoptosisrateandapoptosisbodyweremeasuredbyMTT,Flow cytometryand Hoechststaining respectively．Furthermore，weanalyzed the expression ofbcl一2，bax，caspase3 genesby RT-PCR afteroverexpressionofIL一24．Forinvivostudy．wefirstestablishedtheMG一63tumormodelbygraftingMG一63cells inahtymienudemice；andtheninje