靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响.pdfVIP

2009；29(11) 南方医科大学学报fJSouthMedUniv) ·2187· 靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细 胞增殖的影响 刘祥厦 ，姚 陈 ，张 辉 ，王三 明2王深明 (中山大学附属第一医院 整形外科 2乳腺外科 ，，麻醉科 ，广 东广 州 5100801 摘要 ：目的 构建靶向端粒酶hTERT基 因mRNA的 shRNA质粒表达载体 ，转染人乳腺癌 MCF．7和 MDA．MB231细 胞系，探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖 的影 响。方法 设计合成端粒酶 hTERT基 因特异性 shRNA干扰序列 ，重组 pSuper-retro—puro质粒 ，转染乳腺癌 MCF．7和 MDA—MB231细胞系 (转染组)，设立正常培养乳腺癌 MCF．7和 MDA—MB231细胞系 (阴性对照组)和pSuper-retro—puro质粒转染 的乳腺癌 MCF．7和 MDA—MB23l细胞系 (空 白对 照 组)，利用端粒重复序列扩增 ．酶联免疫 吸附测定法 (TRAP—ELISA)检测细胞端粒酶活性 ，MTT实验及琼脂糖细胞集落 形成实验检测细胞增殖能力等 。结果 成功构建 pSuper—retro—puro．TERTRNAi#1、≠f2质粒并转染乳腺癌 MCF．7和 MDA—MB231细胞系 ，转染后细胞端粒酶活性较转染前 明显下调 ，差异有统计学意义 (P0．005)；MTT法检测细胞增殖 能力显示 ，MCF．7及 MDA—MB231转染组细胞增殖活性较 阴性对照组低 ，差异有统计学意义 (P0．05)；软琼脂集落形 成实验表 明MCF．7和MDAMB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降，差异有统计学意义 (P0．001)。 结论 通过 RNAi技术特异性干扰 hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性，并可导致细胞增殖能力的减 弱 ，以端粒酶为靶点的基 因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法 。 关键词 ：乳腺癌 ；端粒酶 ；hTERT；RNA干扰 ；基因治疗 中图分类号 ：R737．31 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4254(2009)l1．2l87．04 Constructionofanexpression vectorcarryingshorthairpin RNA targetinghTERT geneand itseffects onbreastcancercelltelomeraseactivityandproliferationinvivo LIUXiang-xia，YAO Chen2，ZHANG Hui，WANG San-ming~，WANGShen—ming DepartmentofPlasticandReconstructiveSurgery， ZDepartmentofBreastSurgery， DepartmentofAnesthesiology， FirstAffiliated Hospital，SunYat·senUniversity，Guangzhou510080，China Abstract：0bjective ToconstructaRNA interferenceexpressionvectortargetinghumantelomerasereversetranscriptase gene(hTERT)geneandinvestigateitseffectsontelomeraseactiviytandproliferationinbreastcancercellsnvitro．Methods TheshRNA sequencestargetinghTERTgeneweredesignedandrecombinedintopSuper-retro-purovector．Thebreastcna cer celllinesMCF一7andMDA．MB231werertansfectedwiththerecombinedvector．andthetelomeraseactiviytofthecellswas testedbytelomeraserepeatsequenceamplification—enzymelinkedimmtmosorbentassay